Богатая тромбоцитами плазма получение


Что можно называть обогащенной тромбоцитами плазмой, а что нельзя

Implant dentistry Vol.10 No.4 2001 Platelet-reach plasma (PRP): what is PRP and what is not PRP? Robert E. Marx, DDS, профессор, директор медицинского факультета университета Майями Перевод Евгения Ханина Использование богатой тромбоцитами плазмы для ускорения роста кости и мягких тканей стало настоящим прорывом в хирургии. Эта относительно новая биотехнология – одно из направлений тканевой инженерии и клеточной терапии, которые в настоящее время привлекают все большее внимание медицинской общественности. Из-за относительной новизны, возможно неправильное понимание и употребление термина «богатая тромбоцитами плазма». Цель настоящей статьи заключается в правильном толковании данного термина. Кроме того, в статье обсуждается безопасность и наиболее эффективные способы использования материала.

Что можно называть обогащенной тромбоцитами плазмой?

Если трактовать термин дословно, то обогащенная тромбоцитами плазма – это плазма, концентрация тромбоцитов в которой превышает нормальную. В норме концентрация тромбоцитов в крови колеблется между 150 тыс./мкл и 350 тыс./мкл и в среднем составляет 200 тыс./мкл. мода стиль Научно доказано, что стимулирующий эффект обогащенной тромбоцитами плазмы проявляется, если концентрация тромбоцитов в ней равна 1.000.000/мкл. Поэтому, на настоящий момент обогащенной тромбоцитами плазмой называют обогащенной тромбоцитами плазмой, если концентрация тромбоцитов в ней равна 1.000.000/мкл. При меньшей концентрации стимулирующий эффект не проявляется, в то же время до сих пор не было показано, что увеличение концентрации тромбоцитов свыше 1.000.000/мкл приводит к дальнейшему ускорению регенерации (рис.1).

Чем обогащенная тромбоцитами плазма отличается от рекомбинантных факторов роста

Поскольку богатую тромбоцитами плазму получают из собственной крови пациента, она абсолютно безопасна с точки зрения переноса инфекционных заболеваний, например, ВИЧ или вирусного гепатита. При увеличении концентрации тромбоцитов увеличивается концентрация факторов роста. Ниже перечислены семь основных факторов роста, которые содержатся в богатой тромбоцитами плазме: тромбоцитарный фактор роста (PDGF-aa, PDGF-bb, PDGF-ab), трансформирующий фактор роста (TGF-β1, TGF-β2), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и фактор роста эпителия (EGF). Эти естественные факторы роста находятся в биологически предопределенных соотношениях. Все это отличает богатую тромбоцитами плазму от рекомбинантных факторов роста. Рекомбинантные факторы роста синтезируются культурой яйцеклеток китайского хомяка, в ядро которых с помощью бактериального вектора введен человеческий ген. В результате продуцируется фактор роста одного типа, который затем применяется без синтетического или естественного носителя. В естественном сгустке содержатся фибрин, фибронектин и витронектин, которые еще называют адгезивными молекулами, которые совершенно необходимы для миграции клеток, остеокондукции, эпителизации и остеоинтеграции. В БоТП эти вещества содержатся в той же концентрации, что и в нормальном сгустке (т.е. 2–4 г/л), именно поэтому БоТП не является фибриновым клеем. Кроме того, БоТП не обладает остеоиндуктивным эффектом, т.е. такая плазма не может инициировать образование кости без присутствия костных клеток. Таким эффектом обладают только костные морфогенетические протеины (КМП), которые способны инициировать образование кости de novo. Однако исследования показали, что при использовании рекомбинантного КМП образуется незрелая кость, причем для ее образования требуется больше времени, чем необходимо в естественных условиях. Возможно, что комбинация БоТП и КМП может значительно усилить активность последнего. БоТП стимулирует ангиогенез (т.е. рост сосудов) и митоз клеток, которые участвуют в процессе регенерации. В силу этого БоТП не может значительно улучшить характеристики неклеточных костных материалов. Однако, поскольку сокращение сроков роста и созревания кости было продемонстрировано при применении аутогенной кости и БоТП, то можно предположить, что применение комбинации аутогенной кости, неклеточного костного материала и БоТП тоже приведет к увеличению скорости формирования кости.

Терминология

Для обозначения БоТП в литературе употребляется множество неточных терминов. Наиболее распространенным среди них является «тромбоцитарный концентрат». Это не совсем верно, потому что истинный тромбоцитарный концентрат должен содержать только тромбоциты, но не содержит плазмы, а поэтому не может свернуться и сформировать сгусток. В клинической практике используется продукт, который является концентратом тромбоцитов в небольшом объеме плазмы, а поэтому правильнее его будет называть «богатая тромбоцитами плазма». Следующий термин «тромбоцитарный гель» также не является точным. БоТП – это не что иное, как кровяной сгусток, в котором увеличена концентрация тромбоцитов. В этом сгустке имеются адгезивные молекулы (о них шла речь выше), которые усиливают биологическую активность сгустка, а в геле их нет. Некоторые авторы переиначили термин БоТП в «сверх-богатая тромбоцитами плазма», «очень богатая тромбоцитами плазма» и даже «очень-очень богатая тромбоцитами плазма», что по своей сути является словоблудием, которое уместно в кофейне, а не в клинической литературе.

Устройства для получения БоТП

На рынке, как компании, так и отдельные исследователи продвигают значительное количество устройств, для получения БоТП. Практикующему врачу следует помнить, что БоТП должна иметь концентрацию тромбоцитов не менее 1 млн./мкл, быть стерильной и апирогенной. Наконец, тромбоциты в БоТП должны быть жизнеспособными. Необходимо заметить, что стерильность и апирогенность – это не одно и то же. Стерильность – это отсутствие микроорганизмов. Апирогенность – это отсутствие любых веществ, которые могут вызвать лихорадку. Так что в устройствах для получения БоТП должны использоваться только сертифицированные апирогенные материалы. Для выделения тромбоцитов из нативной крови, центрифуга должна работать в два этапа. На первом этапе эритроциты отделяются от плазмы и лейкоцитов с тромбоцитами. Во время второго этапа происходит окончательное разделение плазмы, лейкоцитов и тромбоцитов с незначительным количеством эритроцитов на БоТП и бедную тромбоцитами плазму (наличие небольшого количества эритроцитов в БоТП неизбежно, потому что молодые и наиболее активные тромбоциты находятся вместе с самой легкой фракцией эритроцитов. Последние и придают БоТП красную окраску. Тромбоциты сами по себе имеют соломено-желтую окраску. – примеч. пер.). При одноэтапном разделении крови истинной БоТП не образуется. Вместо этого получается смесь богатой и бедной тромбоцитами плазмы с крайне низкой концентрацией тромбоцитов. Независимо от скорости вращения центрифуги и времени центрифугирования разделение эритроцитов и тромбоцитов за один этап невозможно. Это замечание для тех, кто собирается приобрести лабораторную центрифугу или ее модификацию для получения БоТП. Такие центрифуги предназначены для ДИАГНОСТИЧЕСКИХ целей, а не для получения БоТП. Они не дают значительного увеличения концентрации тромбоцитов, повреждают последние при выделении, не одобрены FDA, в некоторых из них используются пирогенные материалы. Так что такие центрифуги использовать не следует. Одобрение FDA и в самом деле необходимо. Пациент защищен от передачи инфекций через БоТП, поскольку этот продукт аутогенный, а вот персонал – нет. Устройства, в которых возможна утечка крови из-за негерметичности контейнеров или из-за установки неправильного противовеса небезопасны как в медицинском аспекте, так и в юридическом. Практическим врачам лучше использовать устройства, которые одобрены FDA как устройства для получения БоТП. Наилучшим решением было бы использование устройств для получения БоТП, для которых имеется одобрение FDA на использование БоТП с материалами для костной подсадки. Ни один стоматолог не может получить лицензию для инфузии или реинфузии крови или ее компонентов, однако этого и не требуется, поскольку БоТП применяется местно. Для получения БоТП достаточно забрать у пациента с помощью венепункции 45–60 мл крови. Такая незначительная кровопотеря никак не влияет на состояние здоровья, не требует никакого лечения или изменения образа жизни. Необходимость в реинфузии отсутствует, тем более что это и не безопасно.

Применение БоТП

БоТП может быть смешана с костным материалом, нанесена на принимающее ложе перед применением костного материала, нанесена поверх костного материала или использована в качестве биологической мембраны. В любом случае БоТП должна быть коагулирована ex tempore (т.е. непосредственно перед использованием). Свертывание крови сопровождается активацией тромбоцитов, последние при этом высвобождают факторы роста (рис.2).

В течение первых 10 мин. тромбоциты секретируют около 70% факторов роста из тех, которые в них находятся. Полное высвобождение факторов роста происходит в течение часа. После этого тромбоциты продолжают синтезировать дополнительное количество факторов роста в течение приблизительно 8 дней, после чего тромбоциты погибают.(Рис. 3)

Таким образом, БоТП должна быть активирована непосредственно перед использованием и ни в коем случае заранее. Необходимо критически относиться к публикациям, в которых сообщается об изучении БоТП, так как зачастую на самом деле речь идет о факторах роста полученных из свежего сгустка или из жидкости над сгустком. БоТП после активации – это и свежий сгусток, и жидкость, которая над ним находится.

Описанные выше факты полезны для тех, кто пытается разработать концепцию получения БоТП из свернувшейся крови, а также компаниям, которые продвигают на рынке «пробирки для разделения сыворотки». Сыворотка – не плазма, в ней практически нет тромбоцитов. Получить же БоТП из свернувшейся крови и вовсе невозможно! Поскольку естественной функцией тромбоцитов является инициация процесса заживления и гемостаз, то при образовании кровяного сгустка все тромбоциты в нем и останутся, а в сыворотке тромбоцитов не будет. Таким образом получить БоТП можно только из крови, которая еще не свернулась, т.е. из крови в которую добавлен антикоагулянт.

Какой антикоагулянт следует использовать

Выбор антикоагулянтов достаточно велик. Несмотря на это, только два из них могут поддерживать метаболизм тромбоцитов и обеспечивать выделение последних, не повреждая их. Цитратный антикоагулянт с декстрозой (ACD-A) наиболее предпочтителен. Цитрат связывает ионы кальция, благодаря чему кровь не свертывается, а декстроза и буферы поддерживают метаболизм тромбоцитов. Именно этот антикоагулянт используется в банках крови для хранения тромбоцитарной массы для инфузий. Цитрат фосфат декстрозный антикоагулянт (CPD) также может быть использован, однако следует принимать во внимание, что по сравнению с ACD-A он на 10% менее эффективно поддерживает метаболизм тромбоцитов.

Факторы роста, БоТП и опухоли

Поскольку факторы роста стимулируют пролиферацию клеток, то было высказано предположение, что рекомбинантный костный морфогенетический протеин и БоТП могут приводить к развитию опухолей. На самом деле ни один фактор роста не может вызвать раковое заболевание, потому что все они влияют на клеточную мембрану, а не на клеточное ядро. Вторичный посредник факторов роста инициирует нормальную экспрессию генов, а не патологическую экспрессию, которая лежит в основе развития опухолей. Факторы роста не являются мутагенами в отличие от истинных канцерогенов, таких как ионизирующие излучения, табачные смолы и т.д. Факторы роста – это естественные белки человеческого организма. БоТП – это естественный кровяной сгусток, но с повышенным содержанием тромбоцитов.

Получение и использование БоТП

БоТП лучше всего получать из аутогенной крови, которую забрали незадолго до начала операции или непосредственно в её начале. Так следует поступать, поскольку тромбоциты концентрируются в области хирургического вмешательства, инициируя коагуляцию и заживление. При этом их концентрация в крови несколько снижается. Концентрация тромбоцитов снижается еще больше, если во время операции происходит гемодилюция из-за внутривенного введения жидкостей. После того, как БоТП получена, она остается стерильной в жидком состоянии в течение 8 часов. Более того, через 8 часов она будет так же эффективна, как была сразу после получения, поэтому ее можно использовать при продолжительных вмешательствах. Сразу после разделения плазмы, лейкоцитов и тромбоцитов на БоТП и бедную тромбоцитами плазму, первую необходимо как можно быстрее отделить от второй. Если этого не сделать, то с течением времени тромбоциты будут диффундировать в бедную тромбоцитами плазму, и их концентрация в БоТП снизится.

Клиническое использование

В стоматологической имплантологии наиболее очевидной областью применения БоТП являются операции, связанные с использованием большого объема костных материалов (синус-лифтинг, наращивание альвеолярного гребня)(рис. 4 и 5).

На сегодняшний день нет документированных клинических исследований, которые бы подтвердили эффективность смеси неклеточного материала для костной подсадки и БоТП. Ведь мишенью БоТП являются стволовые клетки и клетки-предшественники, а в неклеточном материале нет ни тех, ни других. Несмотря на это можно ожидать, что применение смеси БоТП, аутогенной кости и неклеточного костного материала или костного морфогенетического протеина будет клинически эффективным. Многообещающе выглядят результаты исследований, где БоТП использовали для обработки ложа перед установкой имплантата. Было продемонстрировано ускорение остеоинтеграции. Применение БоТП показано в области верхней челюсти, при наличии кости плохого качества, остеопорозе, вмешательствах, предназначенных для сохранения отторгающихся имплантатов и т.д. Доказана эффективность БоТП для ускорения заживления мягких тканей и эпителизации. Учитывая вышесказанное, использование БоТП показано при пересадке свободного соединительнотканного трансплантата, манипуляциях со слизисто-надкостничным лоскутом и наращивании мягких тканей при косметических вмешательствах в полости рта. Факторы роста вообще и БоТП в частности являются частью новой биотехнологии, эффективность которой уже доказана и оптимистичное будущее которой не вызывает сомнений. Точное понимание этой технологии и правильное её использование на благо пациентов, которые вверяют в наши руки свое здоровье, является задачей практикующего врача. Надеюсь, что настоящая статья послужила этой цели.

www.dental-azbuka.ru

Способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии. Сущность изобретения состоит в том, что выполняют забор крови из локтевой вены больного первым и вторым шприцем-пробирками. Первый шприц-пробирку центрифугируют при ускорении 250 g в течение 10 минут. Образовавшуюся плазму и свернувшуюся кровь во втором шприце-пробирке центрифугируют с ускорением 1000 g в течение 10 минут. Бедную тромбоцитами плазму отделяют от обогащенной тромбоцитами плазмы. Готовят активатор обогащенной тромбоцитами плазмы из надосадочной жидкости после центрифугирования свернувшейся крови и бедной тромбоцитами плазмы, при соотношении масс в частях: 1:1, и 10% раствора хлористого кальция. Последний вводят капельно, при перемешивании до получения требуемой консистенции смеси. Обогащенную тромбоцитами плазму смешивают с активатором при соотношении масс в частях: 1:3 соответственно. Использование способа позволяет осуществить более полное извлечение тромбоцитов из отобранной крови, что повышает эффективность, физиологичность и безопасность получаемой плазмы. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области медицины, а также к препаратам, используемым для медицинских целей, содержащим материалы из млекопитающих, в частности содержащим составляющие крови человека, и может быть использовано в стоматологии при хирургическом лечении.

Известен способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии, в соответствии с которым осуществляют забор крови из локтевой вены в вакуумные пластиковые пробирки объемом 9 мл, внутри которых уже содержится активатор свертывания сыворотки (плазмы). На лабораторной центрифуге фирмы «Heltich» одноэтапно центрифугируют отобранную кровь в этой же пробирке в течение 12 минут при скорости 2600 об/мин. Конечным продуктом является тромбоцитарно-фибриновый гель (М.Ю.Юрченко, А.В.Шумский «Обзор оборудования и методик получения аутогенной обогащенной тромбоцитами плазмы в стоматологии» // журнал «Новое в стоматологии», 2003 г., №7, с.47).

Недостаток известного способа состоит в том, что в нем используют для активации тромбоцитов активаторы животного происхождения или искусственно синтезированные, что снижает физиологичность способа. Кроме того, способ не позволяет получить из отобранного материала максимальное количество тромбоцитов, т.е. максимально использовать отобранный материал, так как в отходы уходит не только осадок красных кровяных телец, но и бедная тромбоцитами плазма. К тому же этот факт снижает экологичность известного способа.

Наиболее близким к предложенному является способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии, включающий забор крови из локтевой вены шприцем-пробиркой объемом 9 мл, в котором содержится антикаогулянт крови - цитрат. Отобранную кровь в этой же пробирке центрифугируют в два этапа в лабораторной центрифуге «Heraeus Labofuge 300». В первом этапе центрифугируют в течение 12 минут со скоростью 4000 об/мин. Затем образовавшуюся плазму - надосадочный слой, из первого шприца-пробирки набирают в другой шприц-пробирку без цитрата и обрабатывают в центрифуге в течение 15 минут при скорости 3600 об/мин. После отделения бедной тромбоцитами плазмы - надосадочный слой, получают конечный продукт - обогащенную тромбоцитами плазму в количестве 0,3 мл. Активируют обогащенную тромбоцитами плазму препаратом «Cerasorb» - искусственно синтезированным бета-трикальций фосфатом. Для этого «Cerasorb» предварительно смешивают с кровью, взятой из раны, а затем к смеси добавляют обогащенную тромбоцитами плазму (М.Ю.Юрченко, А.В.Шумский «Обзор оборудования и методик получения аутогенной обогащенной тромбоцитами плазмы в стоматологии» // журнал «Новое в стоматологии», 2003 г., №7, с.46).

Недостаток известного способа состоит, прежде всего, в малом количестве конечного продукта: из 9 мл крови получается 0,3 мл обогащенной тромбоцитами плазмы, несмотря на двухэтапность обработки крови центрифугированием, что снижает эффективность известного способа. Это объясняется тем, что в известном способе на каждом этапе используются высокие скорости вращения центрифуги: 4000 и 3600 об/мин, что не позволяет последовательно разделить составляющие крови с учетом их веса и часть тромбоцитов уходит в неиспользуемый осадок. Кроме того, в отходы уходит и бедная тромбоцитами плазма. В результате известный способ не обеспечивает максимальное использование отобранного для получения тромбоцитов материала, что, в свою очередь, не позволяет получить максимальное извлечение тромбоцитов из отобранной крови. Причем, поскольку в известном способе в отходы уходят как осадок красных кровяных телец, образовавшийся после первого центрифугирования, так и бедная тромбоцитами плазма, то это снижает экологичность известного способа.

Кроме того, в процессе приготовления активатора в известном способе используют кровь из раны больного, что небезопасно в отношении возможности внесения инфекции, так как вместе с кровью в активатор могут попасть частицы отмершей ткани, гноя и т.п. Это, а также использование искусственно синтезированного активатора свертывания сыворотки, снижает физиологичность способа.

Таким образом, выявленные в результате патентного поиска способы получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии, аналог и наиболее близкий к заявленному, при осуществлении не обеспечивают достижение технического результата, заключающегося в возможности более полного извлечение тромбоцитов из отобранной крови, а следовательно, в повышении эффективности способа, в повышении физиологичности, в снижении безопасности, в повышении экологичности способа, за счет возможности снижения количества отходов после получения конечного продукта по способу.

Заявленный способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии решает задачу создания соответствующего способа, осуществление которого обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в возможности более полного извлечение тромбоцитов из отобранной крови, а следовательно, в повышении эффективности способа, в повышении физиологичности, в снижении безопасности, в повышении экологичности способа за счет возможности снижения количества отходов после получения конечного продукта по способу.

Сущность изобретения состоит в том, что в способе получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии, включающем забор крови из локтевой вены шприцем-пробиркой, центрифугирование отобранной крови в этой же пробирке, перенос плазмы (надосадочная фракция, отделившаяся после цетрифугирования,) в пустую пробирку, центрифугирование вновь отобранного продукта, удаление из пробирки образовавшегося надосадка (плазма, бедная тромбоцитами,) активирование оставшейся в пробирке обогащенной тромбоцитами плазмы, новым является то, что дополнительно осуществляют забор крови вторым шприцем-пробиркой в количестве, составляющем половину объема отобранной крови первым шприцем -пробиркой, которую оставляют в вертикальном положении для свертывания крови, при этом первый шприц-пробирку с отобранной кровью помещают в центрифугу и центрифугируют при ускорении 250 g в течение 10 минут, после чего образовавшуюся плазму переносят в пустую пробирку и центрифугируют с ускорением 1000 g в течение 10 минут, затем пробирку извлекают из центрифуги, после чего образовавшуюся после центрифугирования плазму, бедную тромбоцитами, отделяют от обогащенной тромбоцитами плазмы и переносят в пустую пробирку, затем готовят активатор обогащенной тромбоцитами плазмы, для чего убеждаются, что во втором шприце-пробирке кровь свернулась, после чего пробирку со свернувшейся кровью помещают в центрифугу и центрифугируют с ускорением 1000 g в течение 10 минут, затем пробирку извлекают из центрифуги и переносят образовавшуюся после центрифугирования сгустившейся крови надосадочную жидкость во вторую пустую пробирку, в которую затем добавляют плазму, бедную тромбоцитами, при соотношении масс в частях: 1:1, и тщательно перемешивают, затем капельно, при перемешивании вводят 10% раствор хлористого кальция до получения требуемой консистенции смеси, все тщательно перемешивают, после чего обогащенную тромбоцитами плазму активируют, для этого смешивают с полученным активатором в соотношении масс в частях: 1:3 соответственно. Кроме того, пробирки с плазмой и со свернувшейся кровью центрифугируют одновременно, при этом предварительно убеждаются в том, что во втором шприце-пробирке кровь свернулась.

Технический результат достигается следующим образом. Признаки формулы изобретения: включающем забор крови из локтевой вены шприцем-пробиркой, центрифугирование отобранной крови в этой же пробирке, перенос плазмы (надосадочная фракция, отделившаяся после первого цетрифугирования,) в пустую пробирку, центрифугирование вновь отобранного продукта, удаление из пробирки образовавшегося надосадка, активирование оставшейся в пробирке обогащенной тромбоцитами плазмы, являются основными при получении богатой тромбоцитами плазмы двухэтапным способом. Эти признаки обеспечивают работоспособность заявленного способа, а следовательно, обеспечивают достижение заявленного технического результата.

Известно, что красные кровяные тельца значительно тяжелее тромбоцитов. Авторы изобретения опытным путем пришли к заключению, что для получения в осадке после первого центрифугирования максимального количества красных кровяных телец достаточно ускорения 250 g. Оптимальное время центрифугирования, при котором в осадок выпадает максимальное число красных кровяных телец, также получено опытным путем авторами заявленного способа и составляет 10 минут. Поскольку в заявленном способе первый шприц-пробирку с отобранной кровью помещают в центрифугу и центрифугируют при ускорении 250 g, то в осадок выпадают красные кровяные тельца как более тяжелые, а тромбоциты как более легкие остаются в надосадочном слое - в плазме. Выбор режима центрифугирования на первом этапе обеспечивает максимальное отделение красных кровяных от тромбоцитов, что способствует более полному извлечению тромбоцитов из отобранной крови и повышает эффективность заявленного способа.

Признаки формулы: «…после чего образовавшуюся плазму переносят в пустую пробирку и центрифугируют…, … образовавшуюся после центрифугирования плазму, бедную тромбоцитами, отделяют от обогащенной тромбоцитами плазмы…» обеспечивают возможность выполнения второго заключительного этапа получения богатой тромбоцитами плазмы, а следовательно, обеспечивают возможность выполнения заявленного способа и достижение заявленного технического результата. Параметры центрифугирования на втором этапе: с ускорением 1000 g в течение 10 минут, получены авторами заявленного способа опытным путем и являются оптимальными для получения максимального количества тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме, что повышает эффективность заявленного способа.

Как показал опыт, благодаря оптимальному подбору режимов центрифугирования, используемый в заявленном способе прием двухэтапного центрифугирования обеспечивает более полное извлечение тромбоцитов из отобранной крови, по сравнению с прототипом, а именно: из 9 мл крови получают 1,5 мл обогащенной тромбоцитами плазмы, в то время как в прототипе из этого же объема отобранного материала получают 0,3 мл обогащенной тромбоцитами плазмы. В результате благодаря оптимальному подбору режимов центрифугирования обеспечивается более полное извлечение тромбоцитов из отобранной крови, что повышает эффективность заявленного способа.

В заявленном способе для активации обогащенной тромбоцитами плазмы используют активатор, который готовят из крови этого же больного, а именно: для активации тромбоцитов в обогащенной плазме используют фибриноген, содержащийся в крови, взятой у этого же больного. Это позволяет отказаться от использования для активации богатой тромбоцитами плазмы бычьим тромбином или искусственно синтезированными активаторами. Кроме того, для приготовления используют только продукты центрифугирования, которые получены из стерильных пробирок. В результате в заявленном способе обеспечивается и повышается, по сравнению с прототипом, безопасность способа, а следовательно, повышается и физиологичность способа.

Для изготовления активатора дополнительно осуществляют забор крови вторым шприцем-пробиркой в количестве, составляющем половину объема отобранной крови первым шприцем-пробиркой. Объем крови, необходимый для получения в достаточном количестве фибриногена, определен авторами изобретения опытным путем и является оптимальным. Этот объем крови обеспечивает в дальнейшем получение фибриногена в количестве, достаточном для активации всего объема обогащенной тромбоцитами плазмы, полученной из отобранного материала - крови больного, в соответствии с заявленным способом, что обеспечивает повышение эффективности заявленного способа. Благодаря тому, что пробирку с кровью для получения активатора оставляют для свертывания крови, причем в вертикальном положении, в результате свертывания крови в нижней части пробирки скапливаются эритроциты как наиболее тяжелые. При этом в надосадочной жидкости концентрируется фибриноген как более легкий. Для окончательного отделения от фибриногена эритроцитов, а также других более тяжелых составляющих крови предварительно убеждаются, что во втором шприце-пробирке кровь свернулась, после чего пробирку со свернувшейся кровью помещают в центрифугу и центрифугируют с ускорением 1000 g в течение 10 минут. Режим центрифугирования получен авторами опытным путем и является оптимальным для извлечения из крови больного максимального количества фибриногена, что повышает эффективность заявленного способа. После центрифугирования вторую пробирку извлекают из центрифуги и переносят надосадочную жидкость, образовавшуюся после центрифугирования сгустившейся крови, во вторую пустую пробирку, тем самым отделяют от образовавшегося осадка надосадочную жидкость, содержащую фибриноген. При этом, благодаря предложенному режиму центрифугирования, в надосадочной жидкости фибриноген содержится в максимальном количестве.

Для повышения эффективности способа, за счет сокращения времени приготовления активатора, пробирки с плазмой и со свернувшейся кровью центрифугируют одновременно, при этом предварительно убеждаются в том, что во втором шприце-пробирке кровь свернулась.

Бедная тромбоцитами плазма также содержит в своем составе фибриноген. Благодаря тому, что в заявленном способе бедную тромбоцитами плазму добавляют в надосадочную жидкость, полученную после центрифугирования свернувшейся крови, общее количество фибриногена увеличивается без увеличения общего объема крови, забираемой у больного. При этом увеличение количественного содержания фибриногена обеспечивает полную, уверенную активацию тромбоцитов в обогащенной плазме. Это обеспечивает физиологичность способа. Кроме того, использование бедной тромбоцитами плазмы снижает в заявленном способе, по сравнению с прототипом, общее количество отходов после обработки крови, что повышает экологичность заявленного способа.

Добавление бедной тромбоцитами плазмы в надосадочную жидкость, полученную после центрифугирования свернувшейся крови, при соотношении масс в частях: 1:1, является оптимальным, получено авторами изобретения опытным путем и обеспечивает содержание фибриногена в полученной жидкой фракции в количестве, необходимом для активации в полном объеме богатой тромбоцитами плазмы, полученной заявленным способом. При этом тщательное перемешивание составляющих обеспечивает равномерное распределение фибриногена в жидкой среде. В результате повышается эффективность заявленного способа.

Введение в полученную смесь 10% раствора хлористого кальция запускает реакцию полимеризации фибриногена, в результате которой образуется фибриновый сгусток. Капельное введение 10% раствора хлористого кальция при перемешивании до получения требуемой консистенции смеси обеспечивает возможность регулирования консистенции активатора (плотности фибринового сгустка), что, в свою очередь, позволяет получить требуемую плотность сгустка активированной обогащенной тромбоцитами плазмы. В результате смешивания обогащенной тромбоцитами плазмы с полученным активатором начинается реакция дегрануляции тромбоцитов, т.е. их активация. Смешивание богатой тромбоцитами плазмы с полученным активатором в соотношении 1:3 соответственно обеспечивает активацию богатой тромбоцитами плазмы в полном объеме, что повышает эффективность заявленного способа.

Кроме того, в процессе приготовления активатора тромбоциты, содержащиеся в бедной тромбоцитами плазме, активируются и после активации богатой тромбоцитами плазмы дополняют общее количество активированных тромбоцитов в конечном продукте. В результате заявленный способ обеспечивает максимальное извлечение тромбоцитов из отобранной у пациента крови, что повышает эффективность заявленного способа.

В результате выполнения заявленного способа получаем выходной продукт для стоматологии: аутогенную активированную обогащенную тромбоцитами плазму в виде сгустка активированных тромбоцитов с повышенным содержанием фибрина, полностью приготовленную из крови больного. При этом активированные тромбоциты являются фактором роста, которые участвуют в регулировании роста и функционировании клеток при регенерации пародонтальных тканей, а фибрин участвует в процессе остеокондукции. Кроме того, поскольку и в бедной тромбоцитами плазме, и в надосадочной жидкости после центрифугирования свернувшейся крови присутствуют лейкоциты, то они содержатся и в конечном продукте, обеспечивая при его непосредственном применении местное антибактериальное действие. При этом основное достоинство способа состоит в том, что активированная обогащенная тромбоцитами плазма готовится полностью из крови самого больного, что исключает риск введения в организм больного несовместимых с кровью больного биологических тел и минимизирует риск инфекционного заражения. Все это повышает безопасность, физиологичность и эффективность заявленного способа. При этом возможность использования бедной тромбоцитами плазмы для приготовления активатора снижает количество отходов при получении богатой тромбоцитами плазмы, что повышает экологичность заявленного способа.

Таким образом, из вышеизложенного следует, что заявленный способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии при осуществлении обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в возможности более полного извлечения тромбоцитов из отобранной крови, а следовательно, в повышении эффективности способа, в повышении физиологичности, в снижении безопасности, в повышении экологичности способа за счет возможности снижения количества отходов после получения конечного продукта по способу.

Заявленный способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии выполняют следующим образом. Выполняют забор крови из локтевой вены больного первым шприцем-пробиркой. Дополнительно осуществляют забор крови вторым шприцем-пробиркой в количестве, составляющем половину объема отобранной крови первым шприцем-пробиркой. Второй шприц-пробирку оставляют в вертикальном положении для свертывания крови. Первый шприц-пробирку с кровью помещают в центрифугу и центрифугируют при ускорении 250 g в течение 10 минут, после чего образовавшуюся плазму переносят в пустую пробирку. Убеждаются, что во втором шприце-пробирке кровь свернулась, после чего пробирки с плазмой и со свернувшейся кровью помещают в центрифугу и центрифугируют с ускорением 1000 g в течение 10 минут. Затем пробирки извлекают из центрифуги, после чего образовавшуюся после центрифугирования плазмы бедную тромбоцитами плазму отделяют от обогащенной тромбоцитами плазмы и переносят в пустую пробирку. После этого готовят активатор обогащенной тромбоцитами плазмы, для чего образовавшуюся после центрифугирования сгустившейся крови надосадочную жидкость переносят во вторую пустую пробирку, в которую затем добавляют плазму, бедную тромбоцитами, при соотношении масс в частях: 1:1, и тщательно перемешивают, затем капельно, при перемешивании вводят 10% раствор хлористого кальция до получения требуемой консистенции смеси, все тщательно перемешивают. После чего обогащенную тромбоцитами плазму активируют, для этого ее смешивают с полученным активатором при соотношении масс в частях: 1:3 соответственно.

При осуществлении способа использовали лабораторную центрифугу, обеспечивающую ускорение не менее 1000 g. Для забора крови из локтевой вены больного использовали стандартную систему с бабочкой. Все пробирки в способе использовали стерильные. Для основного забора крови использовали шприц-пробирку объемом 9 мл типа EDTA/K2-Gel; для дополнительного забора крови использовали шприц-пробирку типа Serum Gel S/4,7; пробирка третья - пробирка с мерными делениями и плотно закрывающей пробкой; пробирка четвертая с плотно закрывающей пробкой типа Vacutainer, объемом 7 мл; пробирка пятая с плотно закрывающей пробкой типа Vacutainer, объемом 10 мл. Переливание жидкостей осуществляли посредством стерильных пастеровских пипеток.

Рекомендуется для оптимального использования центрифуги и для максимального снижения вибрации, что важно для полного оседания частиц крови, использовать четное число пробирок, например, две при основном заборе крови - первые пробирки и две при дополнительном - вторые пробирки.

После центрифугирования плазму из первых пробирок переносят соответственно в третьи пробирки. Количество плазмы в пробирках выравнивают переливанием друг в друга. Из третьих пробирок после центрифугирования бедную тромбоцитами плазму сливают в четвертую пробирку, а оставшуюся в третьих пробирках обогащенную тромбоцитами плазму сливают в одну третью пробирку. После чего готовят активатор обогащенной тромбоцитами плазмы. Надосадочную жидкость из вторых пробирок сливают в пятую пробирку. К содержимому пятой пробирки добавляют в плазму, бедную тромбоцитами, при соотношении масс в частях: 1:1, и тщательно перемешивают. Затем капельно, при перемешивании вводят 10% раствор хлористого кальция до получения требуемой консистенции смеси, все тщательно перемешивают. Затем обогащенную тромбоцитами плазму активируют, для чего смешивают с активатором в соотношении 1:3 соответственно.

При использовании заявленного способа из 9 мл крови, забираемой у больного, было получено 1,5 мл обогащенной тромбоцитами плазмы.

1. Способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии, включающий забор крови из локтевой вены шприцем-пробиркой, центрифугирование отобранной крови в этой же пробирке, перенос плазмы (надосадочная фракция, отделившаяся после центрифугирования) в пустую пробирку, центрифугирование вновь отобранного продукта, удаление из пробирки образовавшегося надосадка (плазма, бедная тромбоцитами), активирование оставшейся в пробирке обогащенной тромбоцитами плазмы, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют забор крови вторым шприцем-пробиркой в количестве, составляющем половину объема отобранной крови первым шприцем-пробиркой, которую оставляют в вертикальном положении для свертывания крови, при этом первый шприц-пробирку с отобранной кровью помещают в центрифугу и центрифугируют при ускорении 250 g в течение 10 мин, после чего образовавшуюся плазму переносят в пустую пробирку и центрифугируют с ускорением 1000 g в течение 10 мин, затем пробирку извлекают из центрифуги, после чего образовавшуюся после центрифугирования плазму, бедную тромбоцитами, отделяют от обогащенной тромбоцитами плазмы и переносят в пустую пробирку, затем готовят активатор обогащенной тромбоцитами плазмы, для чего убеждаются, что во втором шприце-пробирке кровь свернулась, после чего пробирку со свернувшейся кровью помещают в центрифугу и центрифугируют с ускорением 1000 g в течение 10 мин, затем пробирку извлекают из центрифуги и переносят образовавшуюся после центрифугирования сгустившейся крови надосадочную жидкость во вторую пустую пробирку, в которую затем добавляют плазму, бедную тромбоцитами, при соотношении масс в частях: 1:1, и тщательно перемешивают, затем капельно при перемешивании вводят 10%-ный раствор хлористого кальция до получения требуемой консистенции смеси, все тщательно перемешивают, после чего обогащенную тромбоцитами плазму активируют, для этого ее смешивают с полученным активатором при соотношении масс в частях: 1:3 соответственно.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что пробирки с плазмой и со свернувшейся кровью центрифугируют одновременно, при этом предварительно убеждаются в том, что во втором шприце-пробирке кровь свернулась.

www.findpatent.ru

Обогащенная тромбоцитами плазма в решении стоматологических проблем

Применение обогащенной тромбоцитами плазмы в стоматологии становится все более распространенной методикой. Она значительно повышает эффективность проведения имплантации или удаления зубов, решения проблем при воспалениях  пародонта. Методика использования PRF-сгустков позволяет значительно ускорить заживление тканей, снизить риски развития инфекционных осложнений, уменьшить болевые ощущения. Об особенностях подготовки  обогащенной тромбоцитами плазмы и ее применения при лечении зубов читайте на estet-portal.com.

Для чего применяется обогащенная тромбоцитами плазма в стоматологии

Обогащенный тромбоцитами фибрин (PRF), который применяется в стоматологии,  – это по сути сгущенная часть плазмы, ее получают из крови пациента методом центрифугирования. PRF - фибриновые сгустки применяют по  следующим показаниям:

В течение примерно недели после введения пациенту PRF – сгустка из него происходит медленное высвобождение лейкоцитов, которые стимулируют остеогенез, протеинов, ускоряющих рост новых тканей, а также различных факторов роста, задача которых состоит в усилении роста новых сосудов, мягких и костных тканей, контроле клеточной пролиферации и выполнения клетками своих функций.

Что нужно стоматологу для работы с обогащенной тромбоцитами плазмой

Для работы с обогащенной тромбоцитами плазмой стоматолог должен располагать следующим оборудованием:

Что касается режима центрифугирования, то основным фактором, влияющим на время подготовки PRF-сгустка, является центробежное ускорение, которое зависит от скорости ротора и расстояния от пробирки до центральной оси аппарата. Поскольку радиус ротора в разных центрифугах отличается, то и скорость центрифугирования тоже будет разной.

Результатом центрифугирования становится PRF - фибриновый сгусток – аутогенная обогащенная тромбоцитами плазма, где сконцентрированы активированные тромбоциты с повышенным содержанием фибрина. Эти тромбоциты регулируют рост и функционирование клеток костной и пародонтальной тканей.

Очень важно, что обогащенная тромбоцитами плазма приготавливается из крови самого пациента, а значит исключен риск введения в организм пациента несовместимых биологических тел и минимизируется риск инфицирования.

Этот фактор повышает эффективность и безопасность метода, а также его привлекательность в глазах пациентов.

Как правильно подготавливать обогащенную тромбоцитами плазму

Для успешной работы с обогащенной тромбоцитами плазмой стоматолог должен соблюдать некоторые несложные правила:

центрифугировать кровь не позднее чем через 1 минуту после забора – это позволит получить достаточно большой размер сгустка;

перед началом центрифугирования перемешать в пробирке забранную кровь – это ускорит образование тромбина и увеличит сгусток;

после окончания центрифугирования сделайте паузу – процесс свертывания крови проходит через формирование тромбопластина, переход протромбина в тромбин и затем формирование из него фибрина, а потому для получения требуемого сгустка необходимо какое-то время.

Использование обогащенной тромбоцитами плазмы позволит стоматологу значительно повысить эффективность заживления тканей у пациентов после удаления зубов или имплантации.

Кроме того, методика позволяет привлечь новых пациентов, поскольку методика  предполагает использование их собственной аутентичной крови, а не посторонних материалов, уменьшает боль после удаления зуба и значительно ускоряет заживление лунок, не допуская осложнений.

estet-portal.com

Преаналитический этап при исследованиях гемостаза

Для исследования системы гемостаза разработаны и полущили широкое распространение высокоточные приборы и надежные лабораторные методы, которые позволяют быстро и эффективно выявить нарушения, приводящие к кровоточивости или тромбозам, однако их воспроизводимость и точность значимо снижаются при несоблюдении правил и условий преаналитического этапа. Взятие образцов крови, транспортировку и их подготовку для исследования системы гемостаза следует рассматривать как важнейшие этапы полущения корректных результатов,

которым должно быть уделено немало внимания в любой лаборатории, выполняющей исследование системы гемостаза.

ПОДГОТОВКА ПАЦИЕНТА

Кровь для исследования гемостаза забирают утром натощак по прошествии не менее. 8 ч после последнего приема пищи. Важно, чтобы взятие венозной крови проводилось в спокойном состоянии, поэтому перед венепункцией пациенту рекомендуют посидеть в течение 20-30 мин. Для получения надежных результатов при исследовании тромбоцитарного гемостаза за день до сдачи анализа пациенту следует избегать стрессов, физических нагрузок, смены режима дня и изменений в питании, приема алкоголя. Особенно тщательно необходимо соблюдать эти условия при исследовании маркеров активации тромбоцитов (β-тромбоглобулина, тромбоцитарного фактора-4).

Врачу необходимо знать о лекарственных препаратах, которые назначены и вводятся пациент}, поскольку ряд медикаментов способны нарушить агрегацию тромбоцитов или вызвать изменение параметров коагуляции. В подобных ситуациях часто приходится учитывать лишь антикоагулянтный или антитромбоцита р- ный эффект применяемых лекарственных препаратов, поскольку выявить многие нарушения гемостаза на фоне применения антикоагулянтов или антиагрегантов невозможно.

У пациентов в реанимационном отделении нельзя брать кровь из подключичного катетера, поскольку это наиболее частая причина попадания гепарина в образец крови. У пациентов в отделении гемодиализа нельзя осуществлять забор крови из артериовенозной фистулы. Однако при некоторых критических состояниях взятие крови в пробирку или вакутейнер из кубитальной вены бывает невозможно из-за снижения давления. В подобных ситуациях кровь для исследования допустимо взять из подключичного катетера, но при этом следует учитывать, что перечень выполняемых методик будет существенно ограничен вследствие возможного наличия гепарина в образце.

АНТИКОАГУЛЯНТЫ

Цитрат натрия

Цитрат натрия связывает ионы кальция и останавливает реакции свертывания. В качестве антикоагулянта для определения большинства показателей коагуляционного и тромбоцитарного звеньев системы гемостаза следует использовать 0,105-0,109 M раствор лимоннокислого натрия, который готовят растворением 3.1-3,2 г Na3C6H507х2h3O в 100 мл воды. Этот раствор следует хранить при температуре от +2 до +8 0C не более 48 ч. При несоблюдении температурного режима в таком растворе развивается микрофлора, вследствие чего концентрация цитрата натрия уменьшается и появляются посторонние примеси, обладающие потенциальной способностью стимулировать тромбоциты и активировать коагуляционные реакции. При наличии рекомендации фирм-производителей реагентов допустимо применение 0,129 M (3,8%) цитрата натрия, однако следует учитывать, что разные концентрации стабилизатора по-разному влияют на ряд показателей коагуляции, в том числе и на МНО. Такое влияние особенно заметно при сравнении реагентов разных производителей.

Этилендиаминтетраацетат

ЭДТА также связывает кальций, останавливая свертывание. Соли этилендиа- минтетраацетата используют для стабилизации образцов, предназначенных для определения клеточного состава периферической крови на гематологических анализаторах. K2-, K3- и Na2-соли ЭДТА в концентрации 1,2-2,0 мг/мл применяют также при дальнейшем исследовании методами ИФА и ПЦР. Недопустимо использование ЭДТА для исследования коагуляции и функциональной способности тромбоцитов.

Гепарин

Гепарин активирует плазменный антитромбин, который необратимо связывает ферментные факторы свертывания. Этот антикоагулянт традиционно применяют в ИФА; как правило, для стабилизации крови необходимо от 12 до 30 ЕД/мл натриевой, калиевой или литиевой соли нефракционированного гепарина. При получении плазмы для исследования ее коагуляционных свойств и функциональной способности тромбоцитов этот антикоагулянт применять нельзя.

ПРОБИРКИ

При взятии и подготовке образцов крови для исследования гемостаза следует применять меры для предупреждения активации тромбоцитов и коагуляционных реакций. Для образцов крови нельзя использовать обычные стеклянные пробирки. поскольку стекло активирует коагуляцию и сорбирует коагуляционные факторы. В течение многих лет для предупреждения этих эффектов использовали силиконирование пробирок, однако появились сведения о недостаточной способности некоторых силиконов предупреждать активацию тромбоцитов. Кроме того, эта процедура трудно стандартизируется и занимает дополнительное время. Как альтернативу силиконированию следует использовать пластиковые пробирки, однако различные сорта пластика также разнятся по способности активировать коагуляционные реакции.

Хорошие результаты дает использование вакуумных систем для взятия крови, содержащих забуференный 3,2% раствор цитрата натрия (буферизация чаще достигается добавкой лимонной кислоты). Цветовая кодировка по ISO/DIS 6710 для вакуумных систем, содержащих цитрат натрия, предусматривает светло- голубой или зеленый цвет колпачков; для пробирок с ЭДТА — лиловый или красный; для пробирок с гепарином — зеленый или оранжевый. Существуют данные о хороших результатах использования специальных CTAD-систем (со стабилизатором, включающим цитрат натрия, трифосаденин, теофиллин и дипиридамол) для определения β-тромбоглобулина, тромбоцитарного фактора-4, PAI-1, контроля гепаринотерапии по АЧТВ или анти-Ха, определения МНО. Однако этот стабилизатор непригоден для исследования функциональной способности тромбоцитов.

ОПТИМАЛЬНОЕ СООТНОШЕНИЕ ЦИТРАТ/КРОВЬ

Поскольку большинство факторов свертывающей системы содержится в плазме, но не в эритроцитах, необходимое количество антикоагулянта зависит от показателя гематокрита у пациента. Для стабилизации образцов крови при значении гематокрита в нормальном диапазоне (от 35 до 50%) принято смешивать один объем 3,2% раствора цитрата натрия с девятью объемами крови. При отклонениях гематокрита от указанных величин следует изменить это соотношение в соответствии с формулой Ingram:

X = V × (100 - НСТ) / (595 - НСТ),

где X — добавляемый объем 3,2% цитрата, мл; V — конечный объем пробирки для крови, мл; HCT — показатель гематокрита у пациента, %.

ТЕХНИКА ВЕНЕПУНКЦИИ

ИГЛА И ПРОБИРКА

Для получения образцов венозной крови необходимо привлекать наиболее опытных и квалифицированных процедурных медсестер, способных в течение нескольких секунд пунктировать вену с наименьшими травматичностью и болезненностью для пациента. Медсестре необходимо внимательно ознакомиться с направлением на исследование, выбрать пробирки, определить корректную последовательность их наполнения, промаркировать их и указать время взятия крови. В некоторых специализированных лабораториях на время взятия крови в помощь процедурной медсестре направляют лабораторного техника, что позволяет значительно увеличить пропускную способность процедурного кабинета, снизить вероятность ошибок дозирования цитрата при сдвигах гематокрита и неточностей маркировки проб.

Образец крови предпочтительнее брать из кубитальной вены; место прокола обрабатывают 70% спиртом и дают высохнуть. Допустимо лишь кратковременное (не более 60 с) наложение жгута на плечо, поскольку при венозном стазе происходит активация фибринолиза; после введения иглы в вену жгут тотчас же расслабляют или удаляют. Наилучшие результаты (с учетом травматичности, болезненности, универсальности, скорости наполнения пробирок) дает использование иглы с калибром 21G. Желательно не брать для исследования гемостаза первые 2-3 мл крови, поэтому их набирают в пробирку без антикоагулянта и используют, например, для получения сыворотки (биохимические, иммунологические тесты и др.). Далее пластиковые или силиконированные пробирки с предварительно добавленным цитратом наполняют кровью из иглы самотеком, сразу же закрывают и перемешивают путем 4-6-кратного переворачивания или вращения (без встряхивания). В связи с использованием игл увеличенного диаметра после венепункции в большинстве ситуаций руку пациента необходимо перебинтовать 2- 4 оборотами бинта, приложив к месту прокола марлевый тампон с 70% спиртом.

Наполнять пробирки с цитратом с помощью шприцев для инъекций нельзя, поскольку при насасывании крови и ее последующем переносе в пробирку происходит активация тромбоцитов и коагуляционных факторов вследствие контакта крови с пластиком шприца и дополнительного вспенивания, обусловленного турбулентным движением крови в шприце.

СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫЕ ВАКУУМНЫЕ СИСТЕМЫ

Стандартом для клинических лабораторий, в которых исследуют показатели гемостаза, считается использование одноразовых вакуумных систем (вакутейнеров и др.), содержащих 3,2% раствор цитрата натрия. Их использование в значительной степени ускоряет, стандартизирует процедуру взятия крови и позволяет существенно снизить разброс результатов. Если кровь для исследования показателей гемостаза берут через катетеры или системы с иглой-бабочкой, необходимо обеспечить полную герметичность системы и предварительное заполнение кровью всех «мертвых» объемов — просвета самого катетера, иглы и переходника, иначе возможны частичная потеря вакуума и неполное заполнение пробирки. Для предотвращения этого, а также попадания кусочков поврежденных тканей кровь для анализа показателей гемостаза не рекомендуют брать в первую вакуумную пробирку.

В условиях выраженного сгущения крови (полицитемии, дегидратации и др.) стандартное количество цитрата в вакуумных системах оказывается избыточным для уменьшенного объема плазмы. При использовании вакуумных пробирок и уровне гематокрита у пациента выше 50% часть раствора цитрата из пробирки следует предварительно отсосать (например, с помощью инсулинового шприца). Подлежащий удалению из стандартной вакуумной пробирки объем цитрата можно определить по формуле:

Y = (V / 10) × (9 × HCT - 405) / (595 - НСТ),

где Y — подлежащий удалению объем цитрата, мл; V — конечный объем пробирки для крови, мл; HCT — показатель гематокрита у пациента, %.

При низком (

clinlabs.com


Смотрите также