Кардиолипиновая проба что это за анализ


Анализ антител к кардиолипину

Существуют три класса антител к кардиолипину, которые можно определить в крови: IgG, IgM и/или IgA. Наиболее часто используют тестирование IgG и IgM.

Антитела igg и igm к кардиолипину  изучаются для диагностики антифосфолипидного синдрома, анализ которых показан в случаях риска выкидышей и спонтанных абортов у беременных, рецидивирующих венозных или артериальных тромбозах и ряда других заболеваний.

При каких заболеваниях рекомендуется выполнять анализ

Методология анализа антител к кардиолипину

Анализ антител к кардиолипину производится путем проведения иммуноферментного анализа (ИФА). Такое исследование основано на использовании антитела к выявляемому антигену, который соединен со специфической меткой (субстратом ферментативной реакции). У пациента берется биологический материал, помещается в лунки (на 20-30 мин.), далее в эти лунки добавляют антитела. Полученная смесь оставляется на определенное время (0,5-5 часов) для того, чтобы антитела нашли и связались с антигеном.

Процедура проведения скрининга

Процедура проведения скрининга (взятие пробы на антитела) выполняется в следующей последовательности:

Данная процедура должна осуществляться натощак, можно пить воду. За день ограничить употребление жирной и жареной пищи, алкоголя.

Профессионально проведенные анализы позволяют своевременно выявить заболевание и разработать план эффективного лечения.

Очень важно проводить анализ такого типа при патологии беременности. Если у беременной будет обнаружены антитела к кардиолипину, то в 90-95% могут возникнуть выкидыши, гипоксия или гибель плода, различные осложнения.

reabilitaciya.org

Кардиолипин (антитела IgG,IgM)

Кардиолипин (дифосфатидилглицерол) — фосфолипид, который присутствует в плазме крови в составе липопротеинов и входит в состав внутренней мембраны митохондрий. Антитела к кардиолипину (АКА) относятся к группе антифосфолипидных антител, обладают протромбогенным потенциалом и являются одним из лабораторных критериев диагноза АФС.

Формируются при целом ряде заболеваний: аутоиммунных заболеваниях, инфекциях (сифилис, лептоспироз, болезнь Лайма, микоплазмоз, туберкулез, вирусных инфекциях — ВИЧ, ВЭБ, парвовирусе В 19, гепатитах), злокачественных новообразованиях. Кроме того, синтез данных антител может быть спровоцирован приемом целого ряда лекарственных препаратов: β-блокаторами, гидралазином, α-интерфероном, кокаином, фенотиазином, фенитоином, хлорпромазином, хинином и другими. В данных клинических случаях АКА не приводят к тромботическому эффекту и транзиторны. Главное значение синтеза данных антител рассматривается при АФС, при котором практически в 80–90% случаев выявляются данные антифосфолипидные антитела (высокая диагностическая чувствительность), вызывают тромботические осложнения и выявляются постоянно, — поэтому при первичном скрининге рекомендовано определение данных антител. Однако необходимо учитывать, что антикардиолипиновые антитела обладают недостаточной специфичностью — они могут быть положительными у здоровых людей (по разным литературным данным, у 2–4%), при других заболеваниях, поэтому при обследовании пациентов необходимо определение тестов с более высокой специфичностью (волчаночного антикоагулянта и антител к β-2-гликопротеиду I). Выявление АКА класса IgM чаще наблюдается в острый период тромботических эпизодов, аутоиммунных и инфекционных заболеваний, при приеме препаратов.

spravochnik.synevo.ua

Нетрепонемные тесты на сифилис

7. Область применения метода

РВ можно ставить в количественном варианте (титром называют последнее разведение, которое дает резкоположительный или положительный результат). Возможно постановка РВ с ликвором. РВ с кардиолипиновым антигеном может использоваться для скрининга.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

РВ может быть положительной у лиц, никогда не болевших и не болеющих сифилисом. Например, ложноположительные (неспецифические) результаты РВ наблюдаются у многих больных лепрой, иногда при малярии, аутоиммунных заболеваниях (системная красная волчанка), распадающихся злокачественных новообразованиях, обширных инфарктах миокарда и других заболеваниях, а порой и у совершенно здоровых людей. Кратковременная неспецифическая позитивация РВ наблюдается у ряда женщин непосредственно перед родами и сразу после них, у наркоманов, после наркоза, приема алкоголя и т. п.

Ложноположительная РВ, как правило, выражена слабо, т. е. выпадает чаще с низким титром реагинов (1:5 — 1:20), или положительная (3+) и слабоположительная (2+). В целом при массовых серологических обследованиях частота ложноположительных результатов РВ составляет около 0,1 - 0,15%.

9. Особенности, преимущества и недостатки

Реакция Вассермана сыграла важную роль в становлении современной сифилидологии, так как: 

Реакции Ваесермана присущи существенные недостатки, ограничивающие ее применение:

1) недостаточна я чувствительность. 

РВ отрицательная в начале первичной стадии, бывает негативной и у 1/3 больных третичным активным сифилисом с поражениями кожи, слизистых оболочек, костей, внутренних органов, центральной нервной системы, поздним врожденным сифилисом, ос обенно если они в прошлом подвергались лечению антибиотиками;

2) недостаточная специфичность. 

Основные недостатки реакции Вассермана: 

Кроме того, этот метод — длительно выполняемый, сравнительно дорогостоящий, субъективно интерпретируемый, часто дающий ложноотрицательные и ложноположительные результаты — не подлежит стандартизации, автоматизации и протоколированию результатов, а следовательно, не подлежит внешнему контролю. 

Таким образом, отдавая должное исторической роли реакции, предложенной Wassermann, Neisser и Bruck, следует признать, что в настоящее время реакция Вассермана в её исходном исполнении — морально устаревший метод. После открытия реакции Вассермана были разработаны другие нетрепонемные тесты

По вышеуказанным причинам, в США и западноевропейских странах вместо реакции Вассермана применяются другие стандартные нетрепонемные тесты.

10. Модификации метода

Реакция Колмера

Чтобы до известной степени преодолеть недостаточную чувствительность РВ, применялась её постановка на холоде (реакция Колмера), которая оказалась более чувствительной, чем в классической постановке. В 1926 г. Kolmer предложил наиболее ценную модификацию РСК, при которой связывание антигена с антителом проходит при комнатной температуре, соединение комплекса антиген — антитело с комплементом — при 6—8 °C, период после добавки гемолитической системы — при 38 °С.

Данная модификация РВ основана на феномене двухфазного связывания комплемента. Особенностью реакции Колмера является двухфазность температурных режимов (первая фаза — при температуре 18-20 °С  в течение 30 мин, вторая — в холодильнике при температуре +4 – +6 °С в течение16-20 ч), при которых протекает связывание комплемента.

Метод обладает более выраженной чувствительностью, чем РВ с кардиолипиновым антигеном, т.к. реакция Колмера улавливает реагины в тех сыворотках, где в силу их небольшой концентрации РВ, поставленная по обычной методике, дает отрицательный результат. 

Ранее эта реакция рекомендовалась для использования в диагностических целях при первичном сифилисе и скрыто протекающей сифилитической инфекции.  Однако, по мнению большинства сифилидологов, реакция Колмера и РВ с кардиолипиновым антигеном при своей высокой чувствительности уступает в своей специфичности трепонемным модификациям РВ.

Количественная методика Боаса

В 1909 году Boas рекомендовал PCK с уменьшающимися объемами исследуемой сыворотки крови. В 1942 г. Kolmer предложил методику PCK с уменьшенным объемом ингредиентов (1/5). Эти методы сохранили ценность до настоящего времени.

В случае получения резко положительных результатов реакций Вассермана и Колмера их ставят с уменьшающимися дозами испытуемой сыворотки для определения титра реагинов. Количественное определение реагинов помогает отдифференцировать ранний и поздний скрытый сифилис, а также позволяет легче оценивать эффективность противосифилитической терапии: снижение титра реагинов свидетельствует об эффективности лечения.

Советские исследования по модификациям РСК

Важным направлением в развитии серодиагностики сифилиса была разработка простых и экономичных модификаций РСК. Советскими специалистами были разработаны неиспользуемые в настоящее время модификации, которые можно было ставить в слабооборудованных лабораториях, в экспедициях и подобных же условиях с ограничением по обеспечению лабораторным оборудованием и реагентами. 

Также применялась одновременная постановка РВ с другими серологическими реакциями. В СССР реакция Вассермана применялась в комплексе с двумя осадочными реакциями (Кана и Закса — Витебского). Иммунологическая сущность этих реакций ничем не отличается от РВ, но для них необходимо готовить более концентрированные антигены, которые при взаимодействии с реагинами сыворотки дают видимый глазом осадок, оцениваемый качественно (4+, 3+ и т. д.).

В 70-е годы в СССР использовались регламентированые приказом Минздрава от 1974 года модификации РСК, одной из которых была реакция Григорьева -Раппопорта, осноснованная на применении в РСК естественного комплемента исследуемой сыворотки. Гемолизин - кроличья гемолитическая сыворотка с  разными титрами. Реакция Вайнштейна - Резниковой основывалась на использовании естественного комплемента и гемолизина испытуемой сыворотки.

Цитохолевая реакция Закс-Витебского. Реакция Кана

Данные реакции основаны на феномене образования мелкодисперсного хлопьевидного осадка (флоккулята или преципитата) при смешивании определенных липоидных антигенов с сывороткой или плазмой крови больных сифилисом. Осадочные реакции (реакция Кана и цитохолевая) также основаны на образовании комплекса антиген — реагины испытуемой сыворотки, проявляющегося макрофлоккулятом. 

Реакция Закса-Витебского  (Sachs H., Witebsky E., 1928) — метод серодиагностики сифилиса, основанный на реакции преципитации, развивающейся в сыворотке крови больного при добавлении концентрированного цитохолевого антигена. Таким образом, это ускоренная реакция преципитации для серодиагностики сифилиса. Синоним — цитохолевая реакция.

Реакция Кана (Kahn R.L., 1922) - серологическая реакция преципитации для диагностики сифилиса, в настоящее время не применяется. При смешивании ликвора или сыворотки крови больного сифилисом с холестеринизированным антигеном выпадают хлопья. Антиген приготовлялся из сердечной мышцы быка путем последовательной эфирной и спиртовой экстракции и прибавлением холестерина к экстракту. 

Реакции Кана и цитохолевая Закса—Витебского много проще по технике выполнения по сравнению с РВ. Для их постановки используются более концентрированные антигены, которые содержат большое количество холестерина. При их постановке выпадает осадок, хорошо видимый невооруженным глазом (иногда для оценки результатов пользуются лупой или агглютининоскопом). 

Осадочные реакции  регистрируют по 4-балльной системе: выпадение крупных хлопьев — 4+; средних — 3+; мелких — 2+ и отсутствие взвешенных частиц — отрицательная.

Обе эти реакции долгое время применялись в комплексе стандартных реакций для диагностики сифилиса, фактически являлась одним из первых вариантов практического применения реакций преципитации. Реакции проводили в пробирках, при этом не требовалось присутствия комплемента; в качестве антигена применяли липидные антигены, приготовленные из сырья животного происхождения. 

Согласно многочисленным данным, реакция Кана дает совпадающие результаты с реакцией Вассермана в 93-96% наблюдений (ее неспецифические результаты регистрируются в 1,6%), а реакция Закса-Витебского — в 95-99% (ее неспецифические результаты регистрируются в 1,3% наблюдений).

В настоящее время, эти реакции не используются для диагностики сифилиса..

Реакция преципитации (РП) — это выпадение в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена и специфического антитела в присутствии электролита.  Образующееся в результате реакции мутное кольцо или осадок называется преципитат. Разновидностью преципитации является реакция флоккуляции (по Рамону, Ramon)— появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) при при смешении токсина с соответствующей иммунной сывороткой (реакции токсин- антитоксин или анатоксин- антитоксин). Хлопьевидный осадок называется флоккулят. Реакция флоккуляции представляет собой преципитацию, при которой растворы антигенов и антител смешивают в пробирке.

Вскоре после открытия комплементсвязывающего теста было установлено, что реакцию между вассермановским антигеном и сифилитическими сыворотками можно обнаружить по преципитации (флокуляции). Феномен образования преципитата при смешивании липоидного антигена с сывороткой или плазмой крови больного сифилисом был описан Michaelis в 1907 году. Это стало основой для разработки множества технических модификаций флокуляционного кардиолипинового теста на сифилис. Благодаря простоте, возможности стандартизации, дешевизне и скорости выполнения, они вытеснили из клинической практики классическую реакцию Вассермана и в настоящее время широко используются для скрининга сифилисной инфекции. 

Осадочные тесты — цитохолевую реакцию Закс-Витебского и реакцию Кана — в течение длительного времени применяли в составе комплекса стандартных реакций (КСР) для диагностики сифилиса. Исследование проводили в пробирках, в качестве антигена использовали оригинальные прописи, включающие в себя кардиолипин, холестерин и лецитин в различных пропорциях, при этом не требовалось дополнительного введения комплемента. Образующийся комплекс микрофлоккулята был виден невооруженным глазом.

В последующие годы при модификации с целью повышения качества кардиолипин-холестерол-лецитинового антигенного комплекса были разработаны и предложены различные коммерческие варианты методики выполнения флоккуляционных тестов (VDRL, USR, RPR, TRUST), отличающиеся как по техническим параметрам проведения реакции, так и по применяемому антигену (соотношению композитных частей).

Флоккуляционные реакции на основе кардиолипинового антигена относят к нетрепонемным реакциям по причине того, что антиген получают не из возбудителя сифилиса (бледной трепонемы), а при технологическом соединении высокоочищенных биологических реагентов животного происхождения (холестерина, кардиолипина и лецитина). Соотношение ингредиентов антигена в настоящее время стандартизировано.

В настоящее время основным нетрепонемным методом серодиагностики сифилиса в России и многих странах СНГ является реакция микропреципитации (РМП).  РМП ставится или с инактивированной сывороткой крови, или с плазмой в день взятия крови из пальца. 

РМП представляет собой реакцию преципитации на стекле. Как и в реакции Вассермана, используется кардиолипиновый антиген. Реакцию проводят с плазмой крови или инактивированной сывороткой крови. Для постановки реакции кровь берут из пальца (получают плазму) или из вены (получают сыворотку). К плазме или сыворотке крови исследуемого добавляется эмульсия кардиолипинового антигена. Для приготовления эмульсии используется хлорид натрия и кардиолипиновый антиген, который изготавливается серийно. 

Принцип РМП заключается в том, что при добавлении эмульсии кардиолипинового антигена к плазме или сыворотке крови больного сифилисом образуются хлопья преципитата белого цвета, а с плазмой или инактивированной сывороткой от здоровых лиц наблюдается отрицательная реакция в виде опалесценции. При постановке РМП с контрольными инактивированными сыворотками больных сифилисом анти­ген должен давать положительную реакцию. Антиген должен давать отрицательную реакцию с сыворот­ками здоровых лиц. Реакцию ставят в планшете для иммунологических реакций.

Результаты РМП оцениваются визуально при достаточном освещении, по объему выпавшего осадка, величине хлопьев, и обозначаются в крестах или «плюсах» (от отрицательной «–» до «++++»). Результаты реакции учитывают, если в контроле отсутствует спонтанная преципитация.

Реакция ставится в качественном и количественном вариантах. Качественная оценка реакции производится по объему выпавшего осадка, величине хлопьев и так же обозначается в «плюсах». Для получения результата необходимо всего 10-40 минут. РМП можно проводить и в количественном варианте: высоким считается разведение ≥ 1:16. РМП в количественной постановке применяется при обследовании больных сифилисом в процессе и после окончания лечения.

РМП несколько превосходит RW по чувствительности, но уступает по специфичности. За рубежом применяются аналоги РМП – RPR и VDRL.

Экспресс - метод (микрореакция на стекле): разновидность РМП, которую ставят с капиллярной кровью из пальца —«экспресс-метод». 

Эта реакция также относится к липидным реакциям. Ставится со специальным кардиолипиновым антигеном и основана на реакции преципитации. Результаты оцениваются качественно как 4+, 3+, 2+ и отрицательные. Преимуществом экспресс-метода являются быстрота получения ответа (через 30 — 40 мин), небольшой объем необходимой для анализа крови (2 — 3 капли плазмы или сыворотки). Ложноположительные результаты при экспресс-методе получают чаще, чем при РВ, поэтому он разрешен для применения только как отборочная реакция при массовых обследованиях населения на сифилис и при обследовании больных в клинико-диагностических лабораториях соматических больниц. Окончательный диагноз сифилиса этим методом устанавливать запрещено. Экспресс-метод нельзя применять у беременных, доноров, а такж е для контроля после лечения больных сифилисом.

Простота схемы выполнения и низкая стоимость позволяют использовать тест РМП как отборочный, при установлении предварительного диагноза сифилиса. 

Положительный результат РМП регистрируется при клинической манифестации сифилиса, через 2–4 недели после образования первичной сифиломы (твердого шанкра), и обычно указывает на повреждение тканей. Применявшееся ранее деление первичного сифилиса на «серонегативный» и «серопозитивный» определялось именно по результату РМП и реакции Вассермана. 

Период времени между инфицированием и появлением положительных результатов серологических тестов называют «серологическим окном». Вследствие этого, ограничено применение РМП на ранних стадиях сифилиса (период инкубации, начало первичного периода), так как данная реакция становится позитивной лишь спустя 2 недели после появления твердого шанкра, 

Во вторичном периоде РМП положительна у 98–100 % больных, а при поздних формах сифилиса (третичный сифилис, поздний скрытый сифилис) – лишь у 60–70 %.

Содержание антител-преципитинов в крови после адекватного специфического лечения сифилиса постепенно понижается, что находит отражение сначала в снижении титров, а затем и степени позитивности РМП, которая из резко положительной становится слабоположительной, а затем и отрицательной. В связи с этим РМП используют для оценки эффективности лечения и как один из критериев установления излеченности или при дифференциальной диагностике реинфекции.

Достоинства РМП: 

1) дешевизна, простота и быстрота постановки (основной скрининговый метод); 

2) РМП с определением титра используют для контроля излеченности сифилиса.

Методика исследования с применением РМП проста в исполнении, недорога, не требует специального оборудования и не занимает длительного времени; при этом реакция демонстрирует приемлемую для скрининга чувствительность и специфичность.

Недостатки РМП: 

1) малая чувствительность при поздних формах сифилиса; 

2) недостаточная специфичность. 

Нетрепонемные тесты, и в т. ч. РМП, имеют невысокую чувствительность (до 70–77% при ранних формах сифилиса и до 30% при поздних формах) и часто дают ложноположительные результаты (более 3%). Нетрепонемные тесты могут быть отрицательными в 70% случаев при латентном и третичном сифилисе.

Поздние стадии (поздний скрытый и третичный сифилис), так как лабильные преципитины первыми элиминируются из организма при длительном течении сифилитической инфекции. 

Большинство исследователей отмечают специфичность РМП на уровне 98%.  Чувствительность РМП меньше, чем у других стандартных, более современных нетрепонемных тестов, например у RPR. Чувствительность РМП колеблется в зависимости от стадии заболевания: при первичном сифилисе — 81%, при вторичном — 91%, при скрытых формах — 94%. 

По данным ГУ «ЦНИКВИ Росздрава» (Приказ № 87 М3 РФ) чувствительность РМП при диагностике всех форм сифилиса составила 95,8%.

Ложноположительные результаты, наблюдаемые при скрининге сифилиса с использованием РМП, обусловлены:

~  наличием в крови антител к ревматоидному фактору; перекрестно реагирующими антителами у больных с аутоиммунной патологией, антифосфолипидным синдромом, пожилых людей, беременных женщин, больных боррелиозом и лептоспирозами, пациентов с обширной соматической патологией; нарушениями обмена липидов; иммунодефицитами различной этиологии.

~ техническими погрешностями при постановке реакций;

РМП не является строго специфической реакцией на сифилис. Реагиновые антитела (неспецифические иммуноглобулины класса IgG и IgM) у больного сифилисом являются комплексным ответом на высвобождение липоидных молекулярных фрагментов из поврежденных клеток хозяина, с одной стороны, и на появление липопротеиноподобных структур, сходных с кардиолипином, входящих в состав бактериальной клетки бледной трепонемы, с другой стороны. 

Антитела, выявляемые с помощью РМП в сыворотке крови людей, нередко могут быть обнаружены при системных поражениях паренхиматозных органов (печени, почек, легких), при инфаркте миокарда, сотрясении мозга, атеросклерозе, коллагенозах, при онкологических заболеваниях, ряде инфекций (туберкулез, сыпной тиф, малярия, лепра), при ревматизме, некоторых патологических и физиологических состояниях (тиреотоксикоз, беременность, менструация). 

Положительные результаты в РМП наблюдают после злоупотребления алкоголем, приема жирной пищи, некоторых лекарственных препаратов. Количество ложноположительных результатов увеличивается при исследовании образцов крови пожилых людей. 

Ложноположительные результаты РМП могут отмечаться при острых (малярия, лептоспироз и др.) и хронических (туберкулез, лепра, вирусный гепатит, боррелиоз и др.) инфекциях, инфаркте миокарда, циррозе печени, коллагенозах (особенно при системной красной волчанке), онкопатологии, вакцинации, употреблении наркотиков, злоупотреблении алкоголем и жирной пищей. Ложноположительными могут быть результаты РМП во время беременности, после родов, а у некоторых женщин и во время менструации. 

Наряду с ложноположительными результатами возможны и ложноотрицательные результаты нетрепонемных тестов в серонегативной фазе первичного сифилиса: 

Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном является относительно несложным исследованием; тем не менее при ее выполнении необходимо соблюдать все рекомендации производителей диагностикума и правила работы в клинико-диагностической лаборатории.

На достоверность результата исследования непосредственное влияние оказывают технические погрешности при постановке РМП:

Источником ошибок при постановке РМП могут являться и следующие моменты:

Все вышеперечисленное обусловлено отсутствием стандартизации метода при его выполнении в ручном режиме. Вышеуказанные ошибки могут приводить к появлению и регистрации как ложноотрицательных, так и ложноположительных результатов реакции.

В связи с вышесказанным, РМП нельзя использовать в качестве единственного метода при исследовании на сифилис беременных женщин; пациентов кардиологических, неврологических, психоневрологических и офтальмологических стационаров; доноров крови и тканей; ВИЧ-инфицированных лиц. 

Поэтому проведение скринингового обследования населения с использованием нетрепонемного теста на определение титра антител методом РМП является недостаточным и требует обязательного параллельного использования трепонемного теста – определения антител методами реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) или иммуноферментного анализа (ИФА). 

В общем случае, для определения специфического характера положительных результатов исследования крови в РМП служат подтверждающие реакции, основанные на использовании антигенов бледной трепонемы (ИФА, РПГА, РИФ, РИТ)

Быстрый плазмареагиновый тест RPR — это быстрый тест для качественного и количественного определения реагиновых антител в сыворотке или плазме крови. Его относят к макроскопическим нетрепонемным флоккуляционным тестам по выявлению антител, ассоциированных с сифилисом. 

1. История метода

Эта реакция была разработана J.Portnoy и соавторами (1957) для массового и быстрого скрининга населения с использованием образцов сыворотки или плазмы. Реакция проводится на пластиковых планшетах с впечатанными кружочками. 

2. Принцип метода

При добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом суспензии стабилизированного кардиолипинового антигена в смеси с мелкодисперсными частицами древесного угля происходит образование комплексов антиген-антитело, собирающих частицы древесного угля в более крупные агрегаты; при этом результат реакции становится возможным учитывать невооруженным глазом.

Авторы метода в 1961 году предложили модификацию RPR на специальных картонных карточках с выдавленными круглыми плоскими неглубокими лунками диаметром 18 мм.

 Капля исследуемого образца (неразведенная плазма или сыворотка крови) смешивается в лунке с каплей стабилизированного стандартного кардиолипинового антигена, в который добавлены частицы мелкодисперсного угля (RPR-антиген). Затем в течение 8 мин планшету вращают на орбитальном ротаторе со скоростью 100 об./мин, чем достигается стандартизация условий равномерного перемещения нанесенных реагентов. В состав набора входят положительный и отрицательный контроли. Учет результатов проводится при хорошем освещении, когда еще не высохла поверхность кружка. При образовании комплексов антиген-антитело мелкодисперсные частицы угля попадают в образовавшуюся сеть и коагулируют.

Для определения специфического характера позитивных результатов исследования крови в RPR проводят дополнительные исследования в подтверждающих реакциях, основанных на применении антигенов бледной трепонемы (ИФА, РПГА, РИФ, РИТ).

4. Учет результатов

Результаты RPR-теста: 

«положительный» — при обнаружении средних и больших агрегатов, 

«слабоположительный» — выявляются редкие небольшие агрегаты, 

«отрицательный» — ровная серая поверхность без видимых агрегатов. 

При положительных результатах рекомендуется исследовать RPR-тест в полуколичественной постановке (разведения от 1:2 до 1:1024). 

5. При каких периодах заболевания лучше использовать

Реакция становится положительной спустя 2—4 недели после появления твердого шанкра.

Ограничениями применения метода RPR являются ранние стадии сифилиса (период инкубации, начало первичного периода), так как данная реакция становится позитивной лишь спустя 2—4  недели после появления твердого шанкра, и поздние стадии (поздний скрытый и третичный сифилис), так как лабильные преципитины первыми элиминируются из организма при длительном течении сифилитической инфекции.

6. Чувствительность и специфичность

Специфичность RPR-теста составляет 98%, а чувствительность зависит от стадии заболевания: при первичном сифилисе — 86%, при вторичном — 100%, при скрытых формах — 98%, при позднем сифилисе — 73% (Кунгуров Н.В. и соавт., 2002). 

7. Область применения метода

Применение указанной реакции при серодиагностике сифилиса регламентировано Приказом Минздрава РФ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» (приложением №1 «Постановка отборочных и диагностических тес¬тов на сифилис»).

Содержание антител-преципитинов в крови после адекватного специфического лечения сифилиса постепенно понижается, что находит отражение сначала в снижении титров, а затем и степени позитивности RPR, которая из резко положительной становится слабоположительной, а затем — отрицательной. В связи с этим RPR используют для оценки эффективности лечения и как один из критериев установления излеченности или при дифференциальной диагностике реинфекции.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Ложноотрицательные результаты. Точно так же, как и в тесте VDRL, при постановке RPR «феномен прозоны» может наблюдаться при постановке с выоскореактивными образцами сывороток. Этот эффект иногда возникает при анализе сывороток, взятых у больных вторичным сифилисом. Поэтому при постановке рекомендуется титрование до тех пор, пока результат не станет однозначным, особенно в случае позитивности трепонемного теста для этого же пациента. 

Ложноположительные результаты (ЛПР) могут быть острыми и хроническими, в зависимости от того, насколько долго они сохраняются: острые — менее 6 месяцев, хронические — 6 месяцев и более. 

Причины острых ЛПР: гепатит, мононуклеоз вызыванный вирусом Эпштейн-Барра, вирусная пневмония, малярия, прививки, беременность, сердечно-сосудистые заболевания, технические ошибки при постановке реакции.

Причины хронических ЛПР: болезни соединительной ткани, болезни иммунной системы, наркомания, лепра, туберкулез, онкопатология, ВИЧ-инфекция, сердечно-сосудистые заболевания, многочисленные переливания крови.

Технические причины ошибочных результатов теста RPR

Реакция быстрого определения реагинов плазмы крови с кардиолипиновым антигеном является относительно несложным исследованием; тем не менее при ее выполнении необходимо соблюдать все рекомендации производителей диагностикума и правила работы в клинико-диагностической лаборатории.

Источником ошибок при постановке RPR могут являться следующие моменты:

• исследование в реакции гиперлипидемичной, гемолизированной сыворотки крови или образцов с признаками бактериального пророста;

• исключение из постановки реакции контрольных сывороток крови, в частности, слабо-положительных;

• неравномерная концентрация антигена в диагностикуме вследствие недостаточного его перемешивания перед использованием;

• нарушение сроков учета результатов реакции, подсыхание реакционной среды на пластинах с формированием псевдофлоккулятов в краевой зоне;

• нарушение сроков и условий хранения антигена и физиологического раствора; использование диагностикума с истекшим сроком годности;

• несоблюдение параметров работы орбитального шейкера (скорости и времени вращения);

• использование при постановке реакций загрязненных пробирок, пипеток, наконечников пипеточных дозаторов, реакционных пластинок, растворов;

• недостаточная тщательность выполнения последовательных двукратных разведений.

Вышеуказанные ошибки могут приводить к появлению как ложноотрицательных, так и ложноположительных результатов реакции.

9. Особенности, преимущества и недостатки

Методика исследования в RPR проста в исполнении, недорога, не требует специального оборудования и не занимает длительного времени; при этом реакция демонстрирует высокую чувствительность и специфичность. Большинство исследователей отмечают самую высокую чувствительность RPR среди нетрепонемных тестов при всех стадиях сифилиса.

Важным условием является то, что все производимые в мире RPR-наборы являются стандартизированными, что делает их результаты сопоставимыми. Вместе с тем положительные результаты RPR-теста не могут безоговорочно трактоваться как наличие сифилитической инфекции в организме исследуемого пациента без подтверждения трепонемными тестами. RPR-тест непригоден для исследования спинномозговой жидкости.

RPR-тест не является строго специфической реакцией на сифилис. В сыворотке крови людей реагиновые антитела нередко обнаруживают при системных поражениях паренхиматозных органов (печени, почек, легких), при инфаркте миокарда, пневмонии, сотрясении мозга, атеросклерозе, при коллагенозах, онкологических заболеваниях, ряде инфекций (туберкулезе, сыпном тифе, малярии, лепре), при ревматизме, некоторых патологических и физиологических состояниях (тиреотоксикозе, беременности, менструации). Положительные результаты RPR наблюдают после злоупотребления алкоголем, приема жирной пищи, на фоне медикаментозной терапии. Количество ложноположительных результатов увеличивается при исследовании образцов крови пожилых людей.

VDRL

Одним из лучших стандартных методов, в которых используются липоидные антигены, является рекомендуемая ВОЗ реакция VDRL. Название этой реакции обусловлено заглавными буквами учреждения, где она была разработана — Venereal Diseases Research Laboratory в Атланте, штате Джорджия, США

1. История метода

Первая успешная попытка стандартизации и создания метода для массового скрининга - микрофлокулляционного теста VDRL – была проведена A. Harris, A. Rosenberg, L. Riedel в 1946 году.

2. Принцип метода

3. Постановка теста

Микрофлокуляционный тест VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) ставится с инактивированной сывороткой крови (или спинномозговой жидкостью) на стеклянных пластинках с лунками. Исследуемая инактивированная сыворотка и свежеприготовленный антиген смешиваются в  стеклянной лунке механическим вращением. Если в сыворотке присутствуют антитела к кардиолипиновому антигену, образуются агрегаты в виде коротких стержневидных структур. Образующийся комплекс «кардиолипиновый антиген-антитело» выявляется под микроскопом (одинаковые объектив и окуляр ×10). 

Используется количественная модификация VDRL до разведения сыворотки 1:64. 

Антиген для реакции VDRL включает 0,03 % кардиолипина, 0,9 % холестерина и 0,21 % лецитина. Его добавляют к инактивированной сыворотке больного, помещаемой на предметное стекло, которое затем вращают в течение 4 — 5 мин при комнатной температуре и сразу регистрируют результат: наличие в сыворотке реагинов вызывает макроскопически видимую флокуляцию. 

Количественную оценку циркулирующих антител получают путем разведения сыворотки перед постановкой реакции в геометрической прогрессии: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16. 

4. Учет результатов

Результаты могут быть выражены качественно или полуколичественно

Результаты оценивают как «реактивные» - при выявлении крупных агрегатов, «слабореактивные» - при незначительной флокуляции, «нереактивные» - при ее отсутствии. 

Количественная постановка реакции с серией двукратных разведений сыворотки физиологическим раствором позволяет получить данные об истинной реактивности сыворотки, а также определить титр (наивысшее разведение, дающее реактивность), значение которого служит базовой величиной реактивности. Изменения титра в процессе и после лечения, вплоть до серонегативации, используются в качестве критерия эффективности терапии. 

5. На каких стадиях заболевания лучше использовать этот тест

Реактоспособность сыворотки в реакции VDRL выявляется примерно через 4 недели после заражения сифилисом.

Титры VDRL увеличиваются у пациентов с острой инфекцией, реинфекцией или реактивацией перенесенной инфекции, которая не лечилась должным образом. Примерно у 72-84% больных с первичным или вторичным сифилисом наблюдается снижение в 4 раза титра VDRL через 6 месяцев после начала правильного лечения. 

6. Чувствительность и специфичность

Специфичность VDRL в среднем составляет 98 %, чувствительность зависит от стадии сифилиса и составляет при первичном сифилисе 78 %, при вторичном – 100 %, при скрытом – 95 %, при позднем сифилисе – 71 % (S. Larsen с соавт., 1995).

7. Область применения метода

Количественная модификация постановки реакции VDRL позволяет проводить оценку эффективности лечения (после лечения идет снижение титров антител вплоть до серонегативации). 

Для детей, инфицированных и проле ченных, антитрепонемные антитела сохраняются долго, и только значительное снижение VDRL позволяет проследить эффективность лечения.

VDRL является единственным тестом, рекомендуемым для исследования спинномозговой жидкости.

8. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Ложноположительные результаты (биологическая неспецифическая реактивность) могут обусловливаться аутоантителами при заболеваниях с нарушениями иммунитета (красная волчанка, ревматизм, болезнь Шегрена, дисгаммаглобулинемия), а также при заболеваниях, связанных с усиленным разрушением клеточных ядер (малярия, пситтакоз, вирусная пневмония, карцинома). 

При качественной постановке VDRL у 1–2 % больных вторичным сифилисом возможен ложноотрицательный результат (феномен прозоны). 

9. Особенности, преимущества и недостатки

Главными достоинствами реакции VDRL являются низкая стоимость, легкость постановки, быстрое получение результатов с довольно высокой чувствительностью и специфичное, хотя и меньшей, чем в реакции с трепонемным антигеном.

10. Модификации метода

bestvenerolog.ru

Процедура, уровни и результаты анализа на антитела к кардиолипину

Кардиолипин – это субстанция, находящаяся в организме человека, страдающего от заболеваний, таких как сифилис, васкулит с мраморной кожей, системная красная волчанка, антифосфолипидный синдром и самопроизвольный аборт. Антитела к кардиолипину – это форма антител, направленных против митохондрии.

Почему проводится анализ?

Анализ на антитела к кардиолипину проводится для обнаружения тромбозных эпизодов, которые не могут быть объяснены. Данный анализ может быть также назначен, если у женщины случаются повторяющиеся выкидыши. Во многих случаях анализ проводится наряду с ЧТВ и тестом на волчаночный антикоагулянт для диагностики точных причин тромбоцитопения. Данные тесты проводятся вместе, если клинические исследования установили возможность аутоиммунного расстройства.

Интерпретация результатов теста

Иногда результаты теста могут быть недостаточными, и подозрение на аутоиммунное расстройство останется, поэтому проводится анализ на антитела к иммуноглобулину A и кардиолипину. Если во время теста обнаружится присутствие антител к кардиолипину, врач может порекомендовать пройти тест снова через 6 недель. Это нужно для того, чтобы проверить, наличие антител, временное или постоянное.

Если известно, что пациент имеет аутоиммунное расстройство, но тесты показывают отрицательный результат, анализы повторяют, пока не будет отмечено наличие антител.

Если результат теста отрицательный, это обычно означает, что класс тестируемых антител отсутствует в сыворотке крови. Существуют различные классы, такие как иммуноглобулин G, иммуноглобулин M и иммуноглобулин A. Все эти классы исследуются по-разному. Иногда антитела кардиолипина могут также появиться из-за инфекции или как побочный эффект от приема медикамента. Так как это наиболее распространенные антифосфолипидные антитела, они также могут появляться автоматически с возрастом. Если концентрация этих антител слишком низка, присутствие может считаться незначительным. Однако эти антитела должны быть исследованы, чтобы проверить причину имеющихся у пациентов симптомов. Эти тесты, таким образом, связаны с симптомами пациента.

Уровни кардиолипина

Если уровень антител на кардиолипин умеренный или высокий в тесте, проводимом через 6 недель, и антитела продолжают находиться в организме, это является индикатором продолжительного заболевания. В редких случаях исследование на кардиолипин может быть рекомендовано для проверки причин сифилиса. Этот тест всегда назначается для подтверждения положительных тестов лаборатории по исследованию венерических болезней и ЭДС. Иногда если используемые в тесте реагенты не очень хорошего качества, анализ может показать ложноположительный результат. Поэтому многие доктора рекомендуют повторить исследование через 6 недель.

doctor-test.ru


Смотрите также