Фагоцитарная активность нейтрофилов


Фагоцитоз анализ крови у детей

Фагоцитоз — поглощение клеткой крупных частиц, видимых в микроскоп (например, микроорганизмов, крупных вирусов, повреждённых тел клеток и т.д.). Процесс фагоцитоза можно подразделить на две фазы. В первой фазе частицы связываются на поверхности мембраны. Во второй фазе происходят собственно поглощение частицы и её дальнейшее разрушение. Различают две основные группы клеток фагоцитов — моно-нуклеарные и полинуклеарные. Полинуклеарные нейтрофилы составляют

первую линию защиты от проникновения в организм разнообразных бактерий, грибов и простейших. Они уничтожают повреждённые и погибшие клетки, участвуют в процессе удаления старых эритроцитов и очистки раневой поверхности.

Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе и диагностике иммунодефицитных состояний: часто рецидивирующих гнойно-воспалительных процессах, длительно не заживающих ран, склонности к послеоперационным осложнениям. Исследование системы фагоцитоза помогает в диагностике вторичных иммунодефицитных состояний, вызванных лекарственной терапией. Наиболее информативным для оценки активности фагоцитоза считают фагоцитарное число, количество активных фагоцитов и индекс завершённости фагоцитоза.

Фагоцитарная активность нейтрофилов

Параметры, характеризующие состояние фагоцитоза.

#9632; Фагоцитарное число. норма — 5-10 микробных частиц. Фагоцитарное число — среднее количество микробов, поглощённых одним нейтрофи-лом крови. Характеризует поглотительную способность нейтрофилов.

#9632; Фагоцитарная ёмкость крови: норма — 12,5-25х10 9 на 1 л крови. Фагоцитарная ёмкость крови — количество микробов, которое могут поглотить нейтрофилы 1 л крови.

#9632; Фагоцитарный показатель: норма 65-95%. Фагоцитарный показатель — относительное количество нейтрофилов (выраженное в процентах), участвующих в фагоцитозе.

#9632; Количество активных фагоцитов: норма — 1,6-5,0х10 9 в 1 л крови. Количество активных фагоцитов — абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов в 1 л крови.

#9632; Индекс завершённости фагоцитоза: норма — более 1. Индекс завершенности фагоцитоза отражает переваривающую способность фагоцитов.

Фагоцитарная активность нейтрофилов обычно повышается в начале развития воспалительного процесса. Её снижение ведёт к хронизации воспалительного процесса и поддержанию аутоиммунного процесса, так как при этом нарушается функция разрушения и выведения иммунных комплексов из организма.

Заболевания и состояния, при которых изменяется фагоцитарная активность нейтрофилов, представлены в табл..

Таблица Заболевания и состояния, при которых изменяется фагоцитарная активность нейтрофилов

Таблица Заболевания и состояния, при которых изменяется фагоцитарная активность нейтрофилов

Спонтанный тест с НСТ

В норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет до 10%.

Спонтанный тест с НСТ (нитросиний тетразолий) позволяет оценить состояние кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов (гранулоцитов) крови in vitro. Он характеризует состояние и степень активации внутриклеточной НАДФ-Н-оксидазной антибактериальной системы. Принцип метода основан на восстановлении поглощённого фагоцитом растворимого красителя НСТ в нерастворимый диформазан под влиянием супероксиданиона (предназначен для внутриклеточного уничтожения инфекционного агента после его поглощения), образующегося в НАДФ-Н-оксидазной реакции. Показатели НСТ-теста повышаются в начальный период острых бактериальных инфекций, тогда как при подос-тром и хроническом течении инфекционного процесса они снижаются. Санация организма от возбудителя сопровождается нормализацией показателя. Резкое снижение свидетельствует о декомпенсации противо-инфекционной защиты и считается прогностически неблагоприятным признаком.

Тест с НСТ играет важную роль в диагностике хронических грануле-матозных заболеваний, которые характеризуются наличием дефектов в НАДФ-Н-оксидазном комплексе. Для пациентов с хроническими гра-нулематозными заболеваниями характерно наличие рецидивирующих инфекций (пневмония, лимфаденит, абсцессы лёгких, печени, кожи), вызываемых Staphylococcus aureus, Klebsiella spp. Candida albicans, Salmonella spp. Escherichia coli, Aspergillus spp. Pseudomonas cepacia, Mycobacterium spp. и Pneumocystis carinii.

Нейтрофилы у пациентов с хроническими гранулематозными заболеваниями имеют нормальную фагоцитарную функцию, но вследствие дефекта в НАДФ-Н-оксидазном комплексе не способны уничтожать микроорганизмы. Наследственные дефекты НАДФ-Н-оксидазного комплекса в большинстве случаев сцеплены с хромосомой X, реже аутосомно-ре-цессивные.

Спонтанный тест с НСТ

Снижение спонтанного теста с НСТ характерно для хронизации воспалительного процесса, врождённых дефектов фагоцитарной системы, вторичных и первичных иммунодефицитов, ВИЧ-инфекции, злокачественных новообразований, тяжёлых ожогов, травм, стрессов, недостаточности питания, лечения цитостатиками и иммунодепрессантами, воздействия ионизирующего излучения.

Повышение спонтанного теста с НСТ отмечают при антигенном раздражении вследствие бактериального воспаления (продромальный период, период острого проявления инфекции при нормальной активности фагоцитоза), хроническом гранулематозе, лейкоцитозе, усилении антите-лозависимой цитотоксичности фагоцитов, аутоаллергических заболеваниях, аллергии.

Активированный тест с НСТ

В норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет 40-80%.

Активированный тест с НСТ позволяет оценить функциональный резерв кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов. Тест используют для выявления резервных возможностей внутриклеточных систем фагоцитов. При сохранённой внутриклеточной антибактериальной активности в фагоцитах происходит резкое возрастание количества формазан-положительных нейтрофилов после их стимуляции латексом. Снижение показателей активированного НСТ-теста нейтрофилов ниже 40% и моноцитов ниже 87% свидетельствует о недостаточности фагоцитоза.

Комментарии

Расшифровка анализа крови на нейтрофилы

Общий (клинический) анализ крови содержит много показателей, по которым врач оценивает состояние здоровья пациента. Изменение значения каждой из этих характеристик указывает на возможность развития той или иной патологии в организме. Одним из важных показателей развернутого общего анализа крови является количество нейтрофилов. Рассмотрим, что означает этот показатель, и на что указывают изменения количества нейтрофилов в анализе крови.

Нейтрофилы в крови человека

Нейтрофилы представляют собой наиболее многочисленный вид лейкоцитов крови (белые клетки крови, которые участвуют в формировании иммунитета организма).

Данные клетки крови образуются в красном костном мозге из гранулоцитарного ростка кроветворения. Нейтрофилы принадлежат к гранулоцитарным клеткам крови, которые содержат в своей цитоплазме зернистость (гранулы). В этих гранулах нейтрофилов находятся миелопероксидаза, лизоцим, катионные белки, кислые и нейтральные гидролазы, коллагеназа, лактоферрин, аминопептидаза. Благодаря такому содержимому своих гранул нейтрофилы выполняют важные функции в организме. Они проникают из крови в органы и ткани организма и уничтожают болезнетворные, чужеродные микроорганизмы. Уничтожение происходит путем фагоцитоза, то есть нейтрофилы поглощают и переваривают чужеродные частицы, после чего сами погибают.

Специалисты выделяют шесть стадий созревания нейтрофилов: миелобласт, промиелоцит, метамиелоцит (юная клетка), палочкоядерная, сегментоядерная. Нейтрофилы сегментоядерные являются зрелыми клетками и содержат ядро, разделенное на сегменты. Все остальные формы являются незрелыми (молодыми). В крови человека значительно больше сегментоядерных нейтрофилов, чем незрелых клеток. В случае появления в организме инфекции или воспалительного процесса костный мозг активно выбрасывает в кровь незрелые формы нейтрофилов. По количеству таких нейтрофилов в анализе крови можно выявить наличие инфекционного процесса в организме и установить активность его протекания.

Большая часть нейтрофилов (около 60%) содержится в костном мозге, чуть менее 40% этих клеток находится в органах и тканях, и только приблизительно 1% нейтрофилов циркулирует в периферической крови человека. При этом согласно расшифровке анализа крови на нейтрофилы в норме в периферической крови должны содержаться только сегментоядерные и палочкоядерные клетки.

Клетка нейтрофила после выхода из костного мозга в течение нескольких часов циркулирует в периферической крови. После этого нейтрофил мигрирует в ткани. Его продолжительность жизни в тканях составляет 2-48 часов, в зависимости от наличия воспалительного процесса. Определяются нейтрофилы в общем анализе крови при подсчете лейкоцитарной формулы (процентного содержания разных видов лейкоцитов относительно их общего количества).

Расшифровка анализа крови на нейтрофилы

Нормальное содержание нейтрофилов в общем анализе крови у взрослых составляет 45-70% от общего содержания всех лейкоцитов или 1,8-6,5×10 9 /л. У детей норма нейтрофилов в крови зависит от возраста. У ребенка первого года жизни она составляет 30-50% или 1,8-8,4×10 9 /л, до семи лет – 35-55% или 2,0-6,0×10 9 /л, до 12 лет – 40-60% или 2,2-6,5×10 9 /л.

При этом в общем количестве нейтрофилов норма сегментоядерных форм составляет 40-68%, палочкоядерных форм – 1-5%.

Повышение количества нейтрофилов (нейтрофилез) является специфической формой защиты организма от проникновения инфекции и развития воспалительного процесса. Обычно нейтрофилез сочетается с лейкоцитозом (повышение числа лейкоцитов), при этом увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов указывает на развитие бактериальной инфекции в организме.

Незначительное повышение содержания нейтрофилов в крови наблюдается при чрезмерной физической нагрузке, сильных психоэмоциональных напряжениях, после сытной еды, при беременности.

Но значительное увеличение количества нейтрофилов в анализе крови может указывать на развитие следующих патологий:

Состояние, при котором в крови появляются незрелые формы нейтрофилов (миелоциты, промиелоциты), увеличивается количество палочкоядерных и юных форм, называют сдвигом лейкоцитарной формулы влево. Такое состояние наблюдается при особо тяжелых и обширных инфекционных процессах, в частности при гнойных инфекциях.

Понижение нейтрофилов в анализе крови (нейтропения) указывает на функциональное или органическое угнетение кроветворения в костном мозге. Еще одной причиной нейтропении может быть активное разрушение нейтрофилов под действием токсических факторов, антител к лейкоцитам, циркулирующих иммунных комплексов. Обычно снижение уровня нейтрофилов наблюдается при ослаблении иммунитета организма.

Специалисты различают нейтропению врожденную, приобретенную и невыясненного происхождения. Хроническая доброкачественная нейтропения нередко встречается у малышей до года жизни. Такое состояние в норме может быть у деток до двух-трех лет, после чего данный показатель крови должен нормализоваться.

Чаще всего понижение нейтрофилов в анализе крови наблюдается при следующих заболеваниях и состояниях:

В некоторых случаях снижение числа нейтрофилов носит временный, непродолжительный характер. Такое состояние, например, наблюдается в ходе проведения противовирусной терапии. Данная нейтропения является обратимой, она проходит после прекращения приема лекарств. Однако если уменьшение числа нейтрофилов в анализе крови сохраняется в течение длительного времени, это может указывать на развитие хронического заболевания кроветворной системы. Кроме того, возрастает риск инфекционных заболеваний, если низкое содержание нейтрофилов сохраняется на протяжении более трех суток.

Комментарии (2)

Форум родителей:

Иммунная система ребенка Иммуноглобулин А, M, G, E, D.

Когда в организм проникает повреждающий фактор (патоген, антиген), он пускает в ход обширный арсенал защитных средств (реакций). Если они работают нормально, возникшее повреждение или быстро устраняется (рана заживает), или вовсе не проявляется (корь, полиомиелит, дифтерия, столбняк) в том случае, если сделана прививка. Функцию распознавания и устранения чужого (не своего) материала, который попадает в организм, выполняет иммунитет.

Наиболее опасными чужеродными агентами, которых необходимо распознать и удалить, для нашей иммунной системы являются микроорганизмы (патогенные бактерии и вирусы), вызывающие инфекционные болезни.

Иммунная система человека состоит из нескольких звеньев, и каждое из них выполняет свою функцию. Передний край обороны - специализированные клетки, которые называются фагоцитами. Они располагаются в кожном эпителии, на слизистых оболочках, в том числе в клетках крови. Фагоциты поглощают чужеродные частицы, и этот процесс в организме называется фагоцитозом. Однако борьба не всегда бывает успешной, и тогда в работу включаются другие механизмы защиты. Для этого в костном мозге человека вырабатываются специальные клетки, так называемые Т-лимфоциты. Существуют Т-лимфоциты - помощники , которые помогают другим клеткам иммунной системы справляться с патогенами, и Т-лимфоциты - убийцы (или Т-киллеры), они уничтожают чужеродные клетки сами. Если и этой линии защиты не удается справиться со своей задачей, Т-лимфоциты по специальным связям (рецепторам) сообщают о чужеродном веществе Другим клеткам - В-лимфоцитам. Они обладают способностью вырабатывать антитела (иммуноглобулины), которые и завершают функцию обезвреживания: антитело соединяется с антигеном - результатом является гибель последнего. Особенностью этого звена иммунной системы является то обстоятельство, что и Т- и В-лимфоциты запоминают чужое вещество (вирус, микроб, аллерген) и при повторной встрече уничтожают его сразу, то есть болезнь не развивается. Это состояние носит название иммунологической - памяти. Недостатком такого барьера является лишь то, что каждая зрелая В-клетка посвящает себя синтезу только одного вида антител.

Всего в организме человека вырабатывается 5 разновидностей антител (иммуноглобулинов), каждый из которых выполняет свою функцию. Они обозначаются заглавными буквами латинского алфавита: А, М, G, D, Е.

Иммуноглобулин А защищает слизистые оболочки человека. Он связывает микробы и вирусы непосредственно в полости рта, в дыхательных путях, пищеварительном тракте и не дает им проникнуть во внутренние органы (легкие, сердце, печень). Именно поэтому иммуноглобулин А считается фактором первичного ответа. Однако он не запоминает вирусы и микробы, то есть не обладает иммунологической памятью, поэтому на каждое последующее поступление вирусов в организм вырабатываются свои антитела. Вот почему, когда результаты анализа крови или других биологических жидкостей (например, крови, слюны, мочи) демонстрируют увеличение содержания иммуноглобулина А, врач делает вывод, что в организме пациента идет процесс острого воспаления.

Иммуноглобулин М вырабатывается В-лимфоцитами в ответ на первое появление патогена и тоже не обладает иммунологической памятью. Однако при повторных встречах с одной и той же инфекцией антитела класса М способны запомнить микроб. На этом свойстве иммуноглобулина М основан механизм прививочных реакций, когда малыми дозами в организм малыша постепенно вводят ослабленные микроорганизмы, чтобы добиться постоянной концентрации иммуноглобулинов М в крови. Тогда, если микроб появится снова, антитела уничтожат его, не давая болезни развиться.

Иммуноглобулин G вырабатываются при появлении вирусов, микробов, аллергенов. Они запоминают эти патогены и предотвращают развитие инфекции. Причем иммуноглобулины G реагируют не только на вновь поступившие бактерии, но и на те микробы и вирусы, которые циркулируют в крови длительное время.

Иммуноглобулин Е появляются в ответ на размножение в организме паразитов (глистов) и контролируют развитие аллергических реакций.

Иммуноглобулин D участвует в синтезе В-лимфоцитов.

Такая многоэтажная защита позволяет предотвратить огромное количество заболеваний. Болезнь развивается только в случае отказа одного или нескольких звеньев системы. Становление барьеров иммунитета у всех людей происходит по-разному, и, как правило, заболевает тот, кто имеет дефицит какого-либо элемента иммунной системы.

Иммунная система малышей

Каждому этапу развития детей соответствует определенный уровень развития иммунной системы. Именно от этого зависит, чем и в каком возрасте малыши болеют и как реагируют на агрессию внешнего мира. По аналогии с развитием мозга процесс созревания иммунной системы продолжается у детей многие годы. Память нейронная и память иммунологическая не наследуются, но приобретаются человеком с возрастом.

Плод начинает вырабатывать собственные иммуноглобулины между 10-й и 12-й неделями внутриутробного развития. Он синтезирует значительное количество иммуноглобулинов G сам и, кроме того, получает их через плаценту от мамы. Материнские антитела класса G защищают новорожденных и детей первых месяцев жизни от дифтерии, вирусов полиомиелита, кори, краснухи, от микробных инфекций, которые вызывают менингит, скарлатину, ревматизм и столбняк.

Если микробы или вирусы, проникающие через плаценту, атакуют плод, его иммунная система отвечает увеличением количества иммуноглобулина М. Повышение содержания этого иммуноглобулина в крови пуповины свидетельствует о том, что малыш болен.

Выработка иммуноглобулина А начинается только с четвертого месяца жизни ребенка, и лишь к 4 годам его показатели приближаются к значениям взрослых. Эти антитела не проникают через плаценту, а значит, у малышей есть физиологический дефицит иммуноглобулина А. Таким образом, слизистые оболочки полости рта, дыхательных путей и пищеварительного тракта детей лишены первого иммунного барьера. Природа восполняет этот дефицит, если ребенок получает грудное молоко, ведь иммуноглобулин А содержится в нем в достаточных для защиты ребенка количествах.

Парадоксальные реакции иммунитета

Подрастая, малыши проходят через несколько критических периодов развития иммунологического ответа, когда на воздействие антигена иммунная система дает парадоксальный, то есть необычный ответ: он может быть либо недостаточным для защиты (иммунодефицит), либо чрезмерным (аллергия

Полезное:

Источники: http://www.medn.ru/statyi/fagocitoz.html, http://ymadam.net/zdorove/sdaem-analizy/analiz-krovi-na-nejtrofily.php, http://www.kid.ru/pregnancy/index167.php3

Комментариев пока нет!

vylechitrebenka.ru

Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови

Полиморфноядерные лейкоциты, моноциты периферической крови способны связывать на своей поверхности, поглощать и переваривать микробную тест-культуру.

Обычно используют стафилококк штамма 209. Однако он практически не подвергается внутриклеточному перевариванию и исключает прямое изучение этой функции фагоцитоза. Мы рекомендуем использовать штамм 9198.

Посуда и оборудование.
  1. Химические пробирки.
  2. Предметные стекла.
  3. Шлифовальное предметное стекло.
  4. Пипетки мерные.
  5. Микроскоп.
  6. Центрифуга.
Реактивы.
  1. Метанол.
  2. Красители: азур II, эозин.
  3. Глицерин.
  4. Среда 199.
  5. Смесь донорских сывороток (2—3) AB(IV) группы.
  6. Изотонический раствор хлорида натрия.
  7. Набор стандартов для определения концентрации микробных тел по мутности.
  8. Суточная культура Staphilococcus epidermidis шт. 9198.
Ход определения.

В стерильную пробирку с заранее внесенным раствором 0,6 мл гепарина (G. center), разведенного 1 : 10, вносят 10 мл крови из кубитальной вены. Кровь тщательно перемешивают и центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин. Плазму вместе со слоем лейкоцитов осторожно отсасывают и помещают в чистую центрифужную пробирку, добавляя 5— 6 мл среды 199. Лейкоциты отмывают центрифугированием 10 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют, а находящиеся в осадке лейкоциты ресуспендируют в среде 199 дважды, каждый раз повторяя процедуру «мягкого» центрифугирования. После последнего центрифугирования пипеткой отсасывают надосадочную жидкость и часть клеточной взвеси, оставив в центрифужной пробирке 0,2 мл (10Х106 кл/мл) клеточной взвеси в среде 199. С косого агара с суточной культурой стафилококка стерильным изотоническим раствором натрия хлорида смывают колонии микробов. Используя стандарт оптической мутности, разводят микробную взвесь до концентрации 1 млрд. микробных клеток в 1 мл; 0,3 мл этой взвеси вносят в пробирку, содержащую 0,2 мл лейкоцитов в среде 199, и добавляют 0,15 мл пула свежих донорских сывороток AB(1V) группы (для опсонизации). Осторожным ротированием перемешивают компоненты и термостатируют 30 мин при 37 °С. По истечении указанного времени в пробирку добавляют 5 мл прогретого до 37 °С изотонического раствора натрия хлорида, встряхивают и центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин. По окончании центрифугирования надосадочную жидкость удаляют и делают мазки из лейкоцитарной взвеси, остатки которой вновь помещают в термостат при 37 °С для продолжения инкубации еще в течение 90 мин. Затем мазки приготавливают повторно из осадка двухчасовой инкубации.

Мазки готовят как обычно, на тщательно вымытых обезжиренных предметных стеклах. Каплю лейкоцитарной взвеси помещают недалеко от края стекла и шлифованным предметным стеклом, поставив его под углом 45° к поверхности впереди капли и подождав, пока капля равномерно распределится вдоль его ребра, легким быстрым движением проводят вперед, не отрывая от предметного стекла раньше, чем иссякнет вся капля.

Правильно сделанный мазок имеет равномерно матовый оттенок, не достигает краев стекла и заканчивается остроконечными язычками.

Приготовленные мазки сушат на воздухе, затем фиксируют 10 мин в абсолютном метиловом спирте и красят по Романовскому—Гимзе азур-эозином.

Состав готового красителя: азур II — 3 г, водорастворимый желтый эозин — 0,8 г, метиловый спирт — 250 мл и глицерин — 250 мл. Для окраски мазков берут 2 капли основного раствора красителя на 1 мл дистиллированной воды.

Можно готовить краску непосредственно перед окрашиванием мазков из азура II, эозина и дистиллированной воды в соотношении 3:2:5. На один мазок наслаивают 3 мл раствора красителя. Длительность окраски 45—50 мин.

После окрашивания мазки просматривают под микроскопом в иммерсионной системе (считают не менее 200 клеток) и производят расчет показателей фагоцитоза.

1. Фагоцитарный индекс (ФИ) — процент клеток, вступивших в фагоцитоз, от общего их числа.

2. Фагоцитарное число (ФЧ) — среднее число бактерий, находящихся внутриклеточно (частное от деления общего числа поглощенных бактерий на число клеток, вступивших в фагоцитоз).

3. Оба показателя рассчитывают на мазках, сделанных после 30- и 90-минутной (т. е. в общей сложности 120-минутной) инкубации, иными словами, речь идет о ФИЗО и ФИ120, соответственно ФЧЗО и ФЧ120.

4. Коэффициент фагоцитарного числа:

5. Индекс бактерицидности нейтрофилов:

где Чу — число убитых внутри фагоцитов микробов; Vn — общее число поглощенных фагоцитами микробов.

6. Опсонический индекс поглощения:

Нормальные величины:

Клиническое значение.

Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе диагностики иммунодефицитных состояний: часто рецидивирующие гнойные воспалительные процессы, длительно не заживающие раны, склонность к послеоперационным осложнениям. Помогает в диагностике вторичных иммунодефицитных состояний, вызванных лекарственной терапией. В связи с тем что фагоциты участвуют в элиминации иммунных комплексов и активность фагоцитоза тесно связана с активностью компонентов комплемента, а именно Сз, концентрацией IgG антител, наличием других опсонирующих факторов, исследование фагоцитоза играет роль в диагностике, оценке активности и эффективности терапии при ревматических болезнях, коллагенозах.

Наиболее информативным для оценки фагоцитарной активности следует считать индекс поглощения, т. е. фагоцитарное число, коэффициент фагоцитарного числа, которые отражают завершенность фагоцитоза и индекс бактерицидности — способность фагоцита переваривать захваченный микроб. Особое значение в выявлении причин изменений фагоцитарной активности имеет определение опсонического индекса поглощения, так как он характеризует наличие сывороточных факторов, сопутствующих миокардитам, ревматизму, ревматоидному артриту и др., способных изменить активность иммунокомпетентных и фагоцитирующих клеток.

bt2.narod.ru

3.3.16. Определение фагоцитарной активности клеток крови.

3.3.16. Определение фагоцитарной активности клеток крови.

Метод основан на явлении фагоцитоза – реакции организма, проявля-ющейся в способности клеток-фагоцитов захватывать и переваривать чуже-родные микроорганизмы.

Реактивы: 1. Стабилизатор крови. 2. Взвесь суточной микробной культуры (0,5-1 млрд.м.к./мл) в физрастворе.

Ход определения. В стерильные центрифужные пробирки вносят по 0,5 мл исследуемой крови и 0,5 мл микробной взвеси, содержащей по оптиче-скому стандарту мутности 0,5-1 млрд. микробных клеток в 1 мл.

В зависимости от задач и целей исследований можно использовать лю-бой из видов живых или убитых микроорганизмов: кишечная палочка, ста-филококк, стрептококк и т.п.

Пробирку с приготовленной смесью осторожно встряхивают, помеща-ют на 30 мин в термостат или водяную баню при 37°С. По истечении указан-ного срока смесь центрифугируют при 2000-3000 оборотов в минуту до рас-слоения жидкости на верхний – соломенно-желтый прозрачный слой плазмы, нижний – слой эритроцитов и среднюю серебристую пленку между ними – слой лейкоцитов. Пастеровской пипеткой с тонко оттянутым капилляром удаляют вначале верхний слой, затем осторожно снимают средний, делают из него 3-5 мазков (по способу приготовления мазков крови), фиксируют ме-тиловым спиртом и окрашивают по методу Романовского-Гимзы.

Расчет результатов. Фагоцитарная активность лейкоцитов. Фа-гоцитарная активность лейкоцитов выражается процентом активных лейко-цитов (фагоцитов) в общем числе подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов. Из 100 подсчитанных подряд клеток выводится их процентное соотношение, т. е. лейкограмма. По найденным 100 фагоцитам определяют число клеток, участвующих в фагоцитозе (захвативших определенное количество микро-бов). Полученный результат выражают в процентах.

Фагоцитарный индекс определяется средним числом фагоцитирован-ных микробов, приходящихся на один активный лейкоцит. Этот показатель характеризует интенсивность фагоцитоза. Для определения фагоцитарного индекса служат те же самые мазки, которые использовали для определения фагоцитарной активности лейкоцитов. В препаратах, приготовленных опи-санным выше способом, подсчитывают не менее 100 лейкоцитов и количе-ство поглощенных ими микробных тел. Вычисляется фагоцитарный индекс путем деления числа фагоцитированных бактерий на число активных лейко-цитов.

Фагоцитарное число является дополнительным показателем, характе-ризующим как агрессивность лейкоцитов, так и их активность. Вычисляется фагоцитарное число путем деления числа фагоцитированных бактерий на общее число подсчитанных лейкоцитов.

Фагоцитарная емкость определяется количеством микробных тел, фа-гоцитированных лейкоцитами в 1 мм3 крови. Этот показатель характеризует общую фагоцитарную активность крови и зависит от количества лейкоцитов, содержащихся в I мм3. Некоторые авторы этот показатель называют фагоци-тарной интенсивностью, абсолютным фагоцитозом или общим фагоцитозом. Вычисляется фагоцитарная емкость умножением фагоцитарного числа на ко-личество лейкоцитов в 1 мм3 крови.

При высокой функциональной активности фагоцитов процесс перевари-вания захваченных микробов начинается немедленно, и уже в первые 30 мин. отмечают не только визуальное изменение микробной клетки, но и преобра-зование некоторых нейтрофильных лейкоцитов (набухание, изменение очер-тания ядра, слабое прокрашивание и т.д.), т.е. появляются признаки, харак-теризующие автолиз (самораспад) и начало деструкции нейтрофила. В тече-ние 2 ч фагоцитарная реакция в норме заканчивается перевариванием захва-ченных микробов и разрушением полиморфноядерных фагоцитов.

Для количественной оценки переваривающей способности фагоцитов введено понятие индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ). Для этого определяют отношение процента фагоцитоза, полученного через 30 мин. ин-кубации, к проценту фагоцитоза, полученному через 2 ч, и отношение фаго-цитарного индекса. Среднее число из этих показателей и служит индексом завершенного фагоцитоза. Принято считать, что ИЗФ больше 1 - завершен-ный, меньше 1 - незавершенный.

У новорожденных животных при значительном различии содержания лейкоцитов целесообразно оценивать фагоцитарную активность клеток крови по элиминирующей ее способности (ЭСК), под которой понимается способ-ность клеток, содержащихся в 1 мкл крови, фагировать некоторое количе-ство антигенно-чужеродных частиц в течение 30 мин. ЭСК выражается коли-чеством поглощенных за 30 мин. частиц (микробов и др.).

zoovet.info


Смотрите также