Подсчет количества лейкоцитов


Подсчет количества лейкоцитов и тромбоцитов

Факторы, влияющие на правильность исследования лейкоцитов

-  криоглобулинемия

-   парапротеинемия

-   нормобласты

-   агрегаты тромбоцитов

-   нелизированные эритроциты

-   длительное хранение крови при комнатной температуре

Нормы содержания лейкоцитов в крови

Возраст                                Количество лейкоцитов

-  1 день                           11.6 - 22.0

-  1 неделя                         8.1.- 14.3

-  1 месяц                          7.6 – 12.4

-  1 год                               6.8 -  11.0

-  Взрослые                       4.0 –   9.0

Методы определения количества лейкоцитов в крови.

-  Подсчет количества лейкоцитов в счетной камере

-  Подсчет лейкоцитов в гематологических анализаторах

Определение количества лейкоцитов в счетной камере.

-  Подсчет лейкоцитов под микроскопом проводят после лизирования эритроцитов в 100 больших квадратах счетной сетки и пересчитывают на 1 л крови, исходя из объема квадратов и разведения крови. Подсчет лейкоцитов должен быть произведен в течение 2-4 ч после взятия крови.

-  При наличии в периферической крови ядросодержащих клеток красного ряд, они не лизируются и подсчитываются вместе с лейкоцитами. В этом случае, чтобы определить истинное количество лейкоцитов, из общего числа посчитанных клеток вычитают количество клеток красного ряда.

-  Например: Общее количество лейкоцитов при подсчете в камере (или на анализаторе) -45х109/л . При подсчете лейкоцитарной формулы найдено, что на 100 лейкоцитов присутствует 50 эритробластов (нормобластов).

Рассчитываем истинное количество лейкоцитов   в крови:

                150 клеток                                           -              45 х 109/л

                100 клеток (лейкоциты)              -             X

                               Х =100*45*10/л /150 = 30*10/л

                               Таким образом, истинное число лейкоцитов в  крови составляет 30 х109/л.

Основные источники ошибок при подсчете лейкоцитов в камере:

-  Неправильное соотношение объемов крови и уксусной кислоты, взятых в пробирку.

-  Неправильно подготовленный раствор уксусной кислоты (при концентрации большей, чем  5%, часть лейкоцитов может лизироваться, что приведет к занижению результата).

-  Длительное нахождение пробы при температуре выше 28°С, что может ускорить лизис лейкоцитов в образце и привести к занижению результата.

-  Неправильное заполнение камеры Горяева. Как и при подсчете эритроцитов, камеру необходимо оставлять на 1 минуту для оседания клеток.

-  Недостаточно хорошо отмытая после предыдущего определения камера Горяева. Оставшиеся в камере лейкоциты могут завышать результаты анализа.

Методы подсчета тромбоцитов

-  в счетной камере

-  мазках крови

-  гематологическом анализаторе

 Каждая группа методов имеет преимущества и недостатки.

-  Подсчет тромбоцитов в камере достаточно точен, не требует для расчета количества эритроцитов. С другой стороны этот метод более трудоемкий, поскольку тромбоциты в нативном  виде представлены мелкими и плохо контрастированными элементами. Недостаток метода - подсчет тромбоцитов в ближайшие часы после взятия крови.

-  Определение количества тромбоцитов в мазках крови значительно уступает по своей точности камерному методу или автоматическим счетчикам. Ошибки при подсчете в мазках крови могут быть обусловлены плохим качеством мазка и связанным с этим неравномерным распределением тромбоцитов, неточным определением количества эритроцитов крови. Существенное  неудобство метода - необходимость одновременного подсчета тромбоцитов и эритроцитов в крови. Преимущество его - возможность исследования тромбоцитов в любое время, независимо от момента взятия крови.

-  Метод определения тромбоцитов с помощью гематологического анализатора позволяет достаточно точно определить количество тромбоцитов, их средний объем и распределение по объему.

dendrit.ru

Подсчета лейкоцитов в счетной камере

Принцип. Подсчет лейкоцитов при микроскопии в определенном числе квадратов счетной камеры и расчет их количества в 1 л крови с учетом разведения крови и объема счетной камеры.

Реактив: 3–5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный для окраски ядер лейкоцитов несколькими каплями раствора метиленового синего. Раствор имеет голубой цвет, может длительно храниться.

Ход определения. В сухую пробирку наливают 0,4 мл раствора уксусной кислоты. Из пальца набирают 0,02 мл крови (можно использовать стабилизированную антикоагулянтом венозную кровь). Вытирают кончик пипетки, затем выдувают из нее кровь на дно пробирки, перемешивают, повторно набирая и выдувая смесь крови и реактива (пипетируя). Маркируют пробирку и оставляют ее до момента подсчета. Хранить смесь крови с раствором уксусной кислоты рекомендуется не более 2–4 ч.

Кровь, разведенную в пробирке уксусной кислотой, тщательно перемешивают и заполняют ею счетную камеру. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 мин для оседания лейкоцитов. Не меняя горизонтального положения камеры, помещают ее на столик микроскопа и при малом увеличении (окуляр 10×, объектив 8×) подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах, что соответствует 1600 малым.

Для большей точности лейкоциты считают по всей сетке в больших квадратах, не разделенных на малые квадраты и полосы, начиная с верхнего левого угла сетки. Для лучшего контрастирования затемняют поле зрения, опуская конденсор и закрывая диафрагму. Считают клетки, расположенные внутри квадрата и лежащие на любых двух линиях, чтобы дважды не подсчитывать одну и ту же клетку.

Расчет числа лейкоцитов проводят по формуле:

где X — число лейкоцитов в 1 мкл крови; а — число лейкоцитов в 100 больших квадратах; 20 — разведение крови; 100 — число больших квадратов; 250 — коэффициент пересчета на 1 мкл, так как объем одного большого квадрата равен 1/250 мкл (сторона квадрата — 1/5 мм, высота — 1/10 мм).

На практике для расчета количества лейкоцитов в 1 мкл крови их число в 100 больших квадратах умножают на 50, а в 1 л — полученную величину умножают на 106.

Примечание. При подсчете лейкоцитов неизбежна ошибка в 6–8 % случаев.

Причины ошибок.

  1. При большом количестве нормоцитов в периферической крови их засчитывают в число лейкоцитов (и лейкоциты, и нормоциты — ядросодержащие клетки). Для того чтобы правильно установить количество лейкоцитов, из общего числа ядросодержащих клеток крови следует вычесть количество нормоцитов.
  2. Остальные ошибки аналогичны тем, которые возникают при подсчете в счетной камере количества эритроцитов.

См. также:

onlab.info

Определение количества лейкоцитов

Главная / Справочник по клинической лабораторной диагностике / Исследование крови / Лейкоциты / Определение количества лейкоцитов

Метод подсчета в камере

Взятие и разведение крови производят пробирочным методом. В пробирку (лучше видалевскую) вносят 0,4 мл разводящей жидкости и 0,02 мл капиллярной крови. Полученное разведение практически считается равным 1 : 20. В качестве разводящей жидкости обычно употребляют 3—5%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым синим (уксусная кислота лизирует эритроциты, метиленовый синий окрашивает ядра лейкоцитов). Перед заполнением камеры Горяева пробирку с разведенной кровью тщательно встряхивают. Камеру заполняют так же, как для подсчета эритроцитов.

Лейкоцитов гораздо меньше, чем эритроцитов (1—2 на большой квадрат), поэтому для точности подсчет производят в 100 больших квадратах (неразграфленных).

Расчет: в 100 больших квадратах (1600 малых) сосчитано а лейкоцитов. Помня, что объем малого квадрата равен 1/4000 мм3, а кровь разведена в 20 раз, рассчитывают количество лейкоцитов в 1 мкл крови: 4000*20 и делят на 1600 = а*1/2. Практически для получения действительного содержания лейкоцитов в 1 мкл крови достаточно полученное при подсчете число разделить пополам и приписать 2 нуля. В среднем ошибка метода составляет ± 7%.

Более точным (ошибка 2—3%) и совершенным является подсчет лейкоцитов с помощью электронных аппаратов. Подсчет лейкоцитов в счетчиках частиц производят по тому же принципу, что и эритроцитов. Предварительно кровь разводят и смешивают с каким-либо лизирующим эритроциты реактивом. В автоанализаторе «Техникон» в качестве такового применяют раствор уксусной кислоты, в аппаратах «Культер» и «Целлоскоп» — сапонин или сапоглобин, которые добавляют разведенными (1 : 500, 1 : 700) в изотоническом растворе хлорида натрия (6 капель на 20 мл разведения).

Далее по теме:

www.medkurs.ru

Подсчет лейкоцитов и лейкоцитарной формулы.

⇐ Предыдущая26272829303132333435Следующая ⇒

Для подсчета лейкоцитов кровь разводят в смесителях, либо в пробирках. Для этой цели применяют 3—5% раствор уксусной кислоты (для разрушения эритроцитов), подкрашенный какой-либо анилиновой краской (для окраски ядер лейкоцитов). Счетную сетку заполняют так же, как для подсчета эритроцитов. Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах. В сетке Горяева удобно считать их в неразграфленных квадратах (их на сетке 100). Учитывая разведение крови и объем жидкости над квадратами, высчитывают постоянный множитель. При разведении в 20 раз он равен 50.

При работе с пробирками в них наливают предварительно 0,38 мл жидкости и выпускают в нее 0,02 мл крови. Для подсчета в пробирках автоматического счета эритроциты гемолизируют сапонином. Нормальное содержание лейкоцитов 4,3 • 109-11,3 • 109/л, или 4300-11 300 в 1 мкл крови.

Лейкоцитарную формулу подсчитывают в окрашенных мазках.

Хороший мазок отвечает следующим требованиям: он тонок, и форменные элементы лежат в нем в один слой; в этом случае мазок оказывается желтым и полупрозрачным. Хороший мазок равномерен, а клетки не повреждены при размазывании. Для того чтобы кровь легла ровным слоем на стекло, его обезжиривают прожиганием над пламенем газовой горелки или выдерживают в смеси спирта и эфира. Концом стекла прикасаются к свежевыпущенной маленькой капле крови и без промедления размазывают ее по стеклу. Перед окраской мазок фиксируют погружением в метанол на 3 мин, в этиловый спирт или его смесь с эфиром на 30 мин. Имеется и ряд других фиксаторов. Высохший после фиксации мазок заливают красителем.

Для различения клеток крови (определения лейкоцитарной формулы) прибегают к дифференциальной окраске. Наиболее широко применяется окраска по Романовскому -Гимзе. Этот краситель представляет собой смесь слабокислой (эозин) и слабощелочной (азур II) красок. Клетки и их части в зависимости от реакции среды в них воспринимают тот или иной компонент красителя: кислые (базофильные) субстанции окрашиваются азуром в голубой цвет, щелочные (оксифильные) окрашиваются эозином в красный цвет; нейтральные воспринимают обе краски и становятся фиолетовыми.

Лейкоцитарной формулой называют процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов крови.

NB!Для достаточно точного ее вычисления необходимо просмотреть не менее 200 лейкоцитов.

Подсчет производят с иммерсионной системой. Ввиду того что клетки располагаются в мазке неравномерно (более крупные отходят к краям), важно придерживаться такого порядка передвижения по мазку, при котором в равной мере просматривались бы его края и середина. Применяется один из двух способов передвижения: по одному из них мазок передвигают от верхнего края до нижнего, отодвигают на 2 —3 поля зрения вдоль края, затем идут в обратном направлении до верхнего края и т. д. При втором способе от края продвигаются на 5—6 полей к середине мазка, затем столько же вбок, потом обратно к краю, отодвигаются на несколько полей вбок и опять повторяют передвижение, пока не будет сосчитано 50 клеток. Просматривают 4 таких участка по 4 углам мазка. Сосчитав 200 клеток, число делят пополам и определяют количество каждого вида лейкоцитов.

Лейкоциты являются элементами крови, быстро реагирующими на различные внешние воздействия и изменения внутри организма. Определение общего количества лейкоцитов может иметь большое диагностическое значение, так как выявляет состояние кроветворных органов или их реакцию на вредные воздействия. Увеличение числа лейкоцитов — лейкоцитоз — является результатом активизации лейкопоэза, уменьшение их числа — лейкопения — может зависеть от угнетения кроветворных органов, их истощения, повышенного распада лейкоцитов под действием антилейкоцитарных антител 1. Нейтрофилы. Наиболее изменчивой группой лейкоцитов являются нейтрофилы, число которых возрастает при многих инфекциях, интоксикациях и распаде тканей.

Характерным для активного нейтропоэза является не только увеличение общего числа нейтрофилов в крови, но и появление в ней незрелых форм: увеличивается число палочкоядерных, появляются юные нейтрофилы, иногда даже миелоциты. Такое «омоложение» состава нейтрофилов носит название сдвига лейкоцитарной формулы влево. Защитная роль нейтрофилов определяется их фагоцитарной функцией, бактерицидным действием и выделением протеолитических ферментов, способствующих рассасыванию некротизированных тканей и заживлению ран.

Наиболее часто регенераторный сдвиг появляется при наличии какого-либо воспалительного процесса или очага некроза. Очень резкий сдвиг влево до промиелоцитов и даже миелобластов при значительном лейкоцитозе носит название лейкемоидной реакции. Уменьшение числа нейтрофилов — абсолютная нейтропения — возникает при угнетающем костный мозг воздействии токсинов некоторых микроорганизмов (возбудители брюшного тифа, бруцеллеза и др.) и вирусов, ионизирующей радиации, ряда лекарственных препаратов.

2. Лимфоциты. Лимфоцитоз наблюдается в период выздоровления от острых инфекционных заболеваний, при инфекционном мононуклеозе, инфекционном лимфоцитозе, лимфолейкозе, краснухе, бруцеллезе, тиреотоксикозе.

Абсолютная лимфопения встречается при лучевой болезни, системных поражениях лимфатического аппарата: лимфогранулематозе, лимфосаркоме.

3. Эозинофилы. Находятся в крови в относительно небольшом количестве (содержатся преимущественно в тканях), но число их возрастает, иногда значительно, при аллергических процессах (сывороточная болезнь, бронхиальная астма), глистных инвазиях, зудящих дерматозах.

Уменьшение количества эозинофилов - эозинопения - вплоть до полного их исчезновения наблюдается при сепсисе, тяжелых формах туберкулеза, тифах, тяжелых интоксикациях.

4.Базофилы. Являются носителями важных медиаторов тканевого обмена (кровяные «эквиваленты» тучных тканевых клеток). При сенсибилизации организма число их увеличивается, при повторном введении аллергена резко уменьшается в результате их распада.

5.Моноциты. Увеличение числа моноцитов - моноцитоз - служит показателем развития иммунных процессов. Моноциты признаются аналогами тканевых макрофагов. Моноцит встречается при ряде хронических заболеваний (хрониосепсис, туберкулез, сифилис). Моноцитопения наблюдается иногда при тяжелых септических, гипертоксических формах брюшного тифа.

Агранулоциты. Отличительной особенностью агранулоцитов являются несегментированное ядро и базофильная (голубая) цитоплазма.

Лимфоцит - наименьший по размеру лейкоцит. Ядро круглое, овальное или бобовидное; занимает большую часть клетки, интенсивно окрашено. Цитоплазма большинства лимфоцитов узким ободком окружает ядро, окрашена в светло-синий цвет и просветляется к ядру.

Моноцит - самая крупная из кровяных клеток. Крупное ядро неправильной формы и относительно светлой окраски. Цитоплазма серовато-голубого, дымчатого цвета, не просветляется к ядру

Кроме перечисленных клеток, в нормальной крови редко, а при заболеваниях часто могут встретиться плазматические клетки. Они отличаются эксцентрически расположенным плотным ядром, часто колесовидной структуры. Число этих клеток увеличивается при некоторых инфекционных заболеваниях, раневом сепсисе, миеломной болезни.

При подсчете лейкоцитарной формулы обращают внимание не только на количественные сдвиги в ней, но и на качественные изменения форменных элементов. Ранее отмечались дегенеративные изменения лейкоцитов. При тяжелых интоксикациях зернистость нейтрофилов становится обильной, крупной, интенсивно окрашенной и носит название токсической (или токсогенной). Иногда в мазках крови обнаруживаются расплывчатые пятна, окрашенные подобно ядерному веществу лейкоцитов. Это так называемые тени Боткина—Гумпрехта — остатки ядерного хроматина, свидетельствующие о повышенной хрупкости лейкоцитов, приводящей к их распаду — лейкоцитолизу

99. Методика определения группы крови, понятие о резус-факторе.

1. Определение группы крови по стандартным сывороткам:

Необходимо следующее оснащение:

o два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I (0), II (А), III (В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV (АВ)

o флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой

o чисто вымытая сухая тарелка

o предметные стекла

o стерильные копьевидные иглы для прокола мякоти пальца

o стерильные марлевые шарики,

o спирт

Стандартные сыворотки для определения группы крови по системе АВО выпускают с определенной цветовой маркировкой: I (0) - бесцветная, II (А) - голубая, III (В) - красная, IV (АВ) – желтая. Сыворотки хранят при температуре 4-10 °С. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной. Наличие хлопьев, осадка, помутнение являются признаками непригодности сыворотки. Первые признаки агглютинации должны появляться не позднее чем через 30 с.

Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I (0), II (А), III (В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I (0), II (А), Ш (В) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие капли разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5—10 раз меньше капли сыворотки. Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путем покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации.

При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании.

При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен.

Возможны следующие 4 комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками I (0), II (А), III (В) групп.

v Все 3 сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь –

I группы.

v Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой П (А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I (0) и III (В) групп. Исследуемая кровь -

II (А) группы.

v Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III (В) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой I (0) и II (А) групп. Исследуемая кровь –

III (В) группы.

v Сыворотки I (0), II (А), III (В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит к IV (АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV (АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV (АВ) группе.

2. Понятие о резус-факторе.

В эритроцитах был обнаружен еще один антиген (агглютиноген), который назвали резус-фактором (Rh). Всех людей делят на лиц с резус-положительной (Rh+) и резус-отрицательной (Rh) кровью. Установлено, что у 85% людей в эритроцитах содержится резус-фактор, т. е. кровь у них является резус-положительной, а у 15% он не содержится, т. е. кровь у этих людей резус-отрицательная. К резус-фактору (резус-антигену) в норме в крови не имеется антирезус-агглютининов (готовых антител). Такие антитела появляются в сыворотке крови лишь в результате иммунизации человека с резус-отрицательной кровью резус-положительными эритроцитами. Подобная иммунизация наступает вследствие повторных переливаний резус-положительной крови резус-отрицательному реципиенту или при беременности женщины с резус-отрицательной кровью резус-положительным плодом. Иммунизированные таким образом люди становятся сенсибилизированными: при переливании им резус-положительной крови развивается тяжелое осложнение — гемотрансфузионный шок.

⇐ Предыдущая26272829303132333435Следующая ⇒

Читайте также:

lektsia.com


Смотрите также