Определение креатинина в сыворотке крови


Креатинин

Существующие методы определения концентрации креатинина делятся на следующие группы.

1. Колориметрические:

2. Ферментативные:

Унифицированным методом определения в сыворотке крови и моче является метод Поппера с соавт., основанный на реакции Яффе.

Определение концентрации креатинина в сыворотке крови методом Поппера

Принцип

Креатинин в щелочной среде дает цветную реакцию с пикриновой кислотой.

Нормальные величины

Сыворотка дети 27‑62 мкмоль/л
подростки 44‑88 мкмоль/л
женщины 44‑88 мкмоль/л
мужчины 44‑100 мкмоль/л
Суточная моча 4,4‑17,7 ммоль/сут
Амниотическая жидкость >177 мкмоль/л

Влияющие факторы

Повышение содержания отмечается при употреблении мясной пищи и при усиленной физической работе. Ложное увеличение показателя может вызвать липемия и гемолиз, ложное снижение — желтуха.

Клинико‑диагностическое значение

Уровень креатинина не является чувствительным показателем заболевания почек в ранней стадии.

Сыворотка

Увеличение содержания креатинина вызывается острым и хроническим нарушением функции почек различного генеза, закупоркой мочевых путей, кишечной непроходимостью, выявляется при заболеваниях печени, голодании, также наблюдается при акромегалии и гипертиреозе.

Гипокреатининемия отмечается при уменьшении мышечной массы, во время беременности (особенно I и II триместры).

Моча

Увеличение концентрации креатинина может быть связано с повышенной физической активностью, с лихорадочными состояниями, отмечается при выраженной недостаточности функции печени, при сахарном диабете, инфекциях. Снижение обнаруживается при голодании, у больных с мышечной атрофией, с дегенерацией и амилоидозом почек, лейкемией.

Амниотическая жидкость

Накопление креатинина выявляется при беременности больных сахарным диабетом, преэклампсии.

Вы можете спросить или оставить свое мнение.

Download SocComments v1.3

biokhimija.ru

Определение креатинина сыворотки крови по Яффе

Креатинин является продуктом белкового обмена, он образуется при взаимодействии аминокислот глицина, аргинина, метионина. Креатинин присутствует в крови в свободном виде и в виде креатинфосфата в мышцах и миокарде.

Креатинин — ангидрид креатина, образуется в мышцах из креатинфосфата, вместе с креатином содержится во фракции остаточного азота крови. Креатинин является постоянной составной частью мочи. Суточное выделение креатинина с мочой постоянно и пропорционально общей мышечной массе тела.

В качестве унифицированного метода при определении концентрации креатинина в крови и моче предложен метод Поппера, основанный на реакции Яффе. Отечественные и импортные наборы для определения уровня креатинина содержат все необходимые реагенты для выполнения исследования данным методом.

Принцип метода

В щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски (реакция Яффе-образование таутомера пикрата креатинина), которую измеряют фотометрически.

Определение в сыворотке крови проводят после депротеинизирования, в моче — после разведения водой. Определение не совсем специфично, интерферируют вещества с активной метиленовой группой и некоторые восстанавливающие вещества, например глюкоза, ацетон, ацетоуксусная и пировиноградная кислоты.

Содержание креатинина сыворотки крови:

мужчины — 61—115 мкмоль/л или 0,061—0,115 ммоль/л;

женщины — 53—97 мкмоль/л или 0,053—0,097 ммоль/л.

Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1:100 (результат умножают на 50).

Необходимые реактивы

1. Пикриновая кислота, насыщенный раствор. Товарная пикриновая кислота содержит 15—20% влажности; кислоту не сушить! Взрывоопасно! В 100 мл воды растворяют 2 г пикриновой кислоты при нагревании на горячей водяной бане. После этого раствор оставляют стоять на 24 ч, периодически перемешивая. Затем раствор фильтруют. Реактив стабилен. Хранят в темной посуде.

2. НСl, 0,1 моль/л.

3. Основной калибровочный раствор креатинина, 10 ммоль/л: 113,1 мг креатинина доводят до 100 мл 0,1 моль/л раствором НСl. Хранят в холодильнике в посуде с притертой пробкой. Для определения креатинина в сыворотке крови рабочий калибровочный раствор получают разведением основного раствора водой в 100 раз; 1 мл раствора содержит 0,1 ммоль креатинина.

4. Натр едкий, 2,5 моль/л.

Ход определения

Определение креатинина в сыворотке крови: 2 мл сыворотки смешивают с 6 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Через 5 мин пробирку помещают на 15—20 сек. в кипящую водяную баню, затем центрифугируют. К 4 мл центрифугата добавляют 0,2 мл 2,5 моль/л раствора едкого натра и тщательно смешивают. Иногда после подщелачивания раствор мутнеет вследствие выпадения фосфатов. В этом случае раствор еще раз центрифугируют. Затем раствор доводят до объема 10 мл водой. Через 10 мин (не позже 20 мин) измеряют в кювете с толщиной слоя в 2 см при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы.

Холостая проба: 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты и 0,2 мл 2,5 моль/л раствора едкого натра доводят до объема 10 мл водой.

Расчет производят по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика: из рабочего калибровочного раствора креатинина готовят разведения, как указано ниже.

Через 10 мин производят измерения при тех же условиях, что и опытные пробы. Калибровочная кривая линейна до 260 мкмоль/л креатинина.

Определение уровня креатинина в моче

В мерной колбе или цилиндре вместимостью 100 мл смешивают 0,5 мл мочи (из суточного количества) с 3 мл раствора пикриновой кислоты. Смесь тщательно встряхивают и добавляют 0,2 мл 2,5 моль/л раствора едкого натра. Выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин. Доводят объем до 100 мл водой. Измеряют на фотометре в кювете с толщиной слоя в 1 см при длине волны 500—600 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы.

Холостая проба: 3 мл раствора пикриновой кислоты и 0,2 мл 2,5 моль/л раствора едкого натра доводят водой до объема 100 мл. Расчет производят по формуле при сравнении с калибровочной пробой.

Калибровочная проба: к 0,5 мл основного калибровочного раствора прибавляют 3 мл раствора пикриновой кислоты и 0,2 мл 2,5 моль/л раствора едкого натра. Далее пробы обрабатывают так же, как опытные.

К = Ск * Еоп * а / Ек * б,

где

К — количество креатинина в суточной моче, мкмоль;

Ск — количество креатинина в калибровочной пробе, 50 мкмоль;

Еоп — экстинкция опытной пробы;

Ек — экстинкция калибровочной пробы;

а — суточное количество мочи;

б — количество мочи, взятой для анализа.

Клинико-диагностическое значение

Нарушение выделения креатинина почками наблюдается лишь при далеко зашедших патологических процессах в них. Устойчивое повышение уровня креатинина в крови аналогично повышению уровня мочевины указывает на нарушение работы почечного фильтра и может считаться ранним показателем почечной недостаточности. Повышение содержания креатинина в сыворотке крови отмечается не только при почечной недостаточности и прогрессирующих диффузных заболеваниях почек, но также при закупорке мочевых путей, кишечной непроходимости (илеусе), тяжелом диабете, декомпенсации сердца, острой желтой атрофии печени, механической желтухе, гипофункции надпочечников, хлорипривной азотемии, голодании и беременности. Азотемия при простатите не дает повышения креатинина.

Понижение уровня креатинина отмечается при анемии, после введения АКТГ.

Содержание креатинина в моче зависит от питания. Помимо эндогенного креатинина в моче содержится креатинин экзогенный, поступающий из мясной пищи.

Повышение содержания его в моче наблюдается при усиленной мышечной работе, лихорадочных состояниях (при которых происходит более интенсивный распад белков протоплазмы), пневмонии, недостаточности печени.

Понижение уровня наблюдается при мышечной атрофии, дегенерации почек, амилоидозе почек, лейкемии.

Одновременное определение у одного и того же пациента концентрации креатинина в крови и моче значительно расширяет возможности исследования функционального состояния почек, позволяя получить более надежную информацию о процессах фильтрации, реабсорбции и секреции.

labx.narod.ru

Определение содержания креатинина в биологических жидкостях

Задание 1. Определить содержание креатинина в сыворотке крови.

Принцип. Креатинин при взаимодействии с пикриновой кислотой в щелочной среде образует соединение оранжево-красного цвета, интенсивность которого определяют фотометрически.

Ход работы. Опытная проба - вносят 0,5 мл сыворотки крови, 1 мл дистиллированной воды и 0,5 мл трихлоруксусной кислоты; калибровочная проба (эталонная) - вносят 0,5 мл калибровочного раствора (концентрация креатинина - 177 мкмоль/л), 1 мл дистиллированной воды и 0,5 мл трихлоруксусной кислоты. Содержимое обеих пробирок перемешивают, оставляют стоять 5 мин, затем центрифугируют при 2500-3000 об/мин на протяжении 5 мин. Надосадочную жидкость сливают. В две центрифужные пробирки вносят по 1 мл надосадочной жидкости из каждой пробы, прибавляют по 0,5 мл пикриновой кислоты (0,04 моль/л) и 0,5 мл NaOH (0,75 моль/л). Перемешивают и точно через 20 мин фотометрируют в 1 см кювете при 505 нм против раствора сравнения. Раствор сравнения: в центрифужную пробирку вносят 1,5 мл дистиллированной воды и 0,5 мл трихлоруксусной кислоты; перемешивают. Из этого раствора берут 1 мл и переносят в отдельную пробирку, прибавляют 0,5 мл пикриновой кислоты и 0,5 мл натрия гидроксида.

Концентрацию креатинина (Х) в мкмоль/л в сыворотке крови рассчитывают по формуле: Х=(Сэт.×Еоп.)/Еэт., где Сэт. - концентрация креатинина в эталонной пробе (177 мкмоль/л); Еоп. - оптическая плотность опытной пробы; Еэт. - оптическая плотность эталонной пробы. В норме содержание креатинина в сыворотке крови (натощак) составляет: для мужчин - 61-115 мкмоль/л, женщин - 53-97 мкмоль/л.

Внимание! При работе необходимо строго придерживаться правил работы с отравляющими веществами в химических лабораториях, так как пикриновая кислота - яд, а трихлоруксусная кислота и NaOH - едкие вещества!

Задание 2. Определить содержание креатинина в моче.

Принцип. Тот же.

Ход работы. Определение проводят в центрифужных пробирках, которые заполняют в соответствии со схемой:

Опытная проба

Раствор сравнения

Моча разбавленная 1:100 (мл)

0,5

-

Вода дистиллированная (мл)

0,25

0,75

Трихлоруксусная кислота (мл)

0,25

0,25

Пикриновая кислота (мл)

0,5

0,5

NaOH (мл)

0,5

0,5

Перемешивают содержимое пробирок и точно через 20 мин измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной пробы против раствора сравнения в 1 см кювете при 505 нм. Эталонный (калибровочный) раствор готовят как и в случае определения креатинина в сыворотке крови. Количество креатинина (У) в ммоль/сут в моче рассчитывают по формуле:

У=(Сэт.×Еоп.×Д×50)/(Еэт.×1000), где Сэт. - концентрация креатинина в эталонной пробе (177 мкмоль/л); Еоп. - оптическая плотность опытной пробы; Еэт. - оптическая плотность эталонной пробы; Д - суточный диурез (1,5 л); 1000 - перевод мкмоль в ммоль; 50 - разведение мочи. В норме содержание креатинина в моче составляет: для мужчин - 8,8-17,7 ммоль/сут (1,0-2,0 г); женщин - 7,1-15,9 ммоль/сут (0,8-1,8 г).

Клинико-диагностическое значение. Концентрация креатинина в сыворотке крови здоровых людей относительно постоянная в результате строгой зависимости между его образованием и выделением. Креатинин относится к беспороговым веществам, он фильтруется только клубочками, но не реабсорбируется. Секреция креатинина канальцами возможна только при высокой концентрации его в крови. Определение креатинина для оценки клубочковой фильтрации обусловлено тем, что его концентрация в плазме обратно пропорциональна клиренсу при постоянных условиях выделения и концентрирования. Критической верхней границей установлена концентрация креатинина на уровне 115 мкмоль/л. Уровень креатинина в сыворотке повышается при ретенционных азотемиях. По нарастанию его концентрации в крови определяют степень хронической почечной недостаточности. Количество выделенного с мочой креатинина прямо зависит от содержания фосфокреатинина в мышцах. Количество креатинина в моче будет изменяться также и в зависимости от содержания креатинина в пище (его много в мясных продуктах). Повышенной экскрецией креатинина (гиперкреатинурия) сопровождаются лихорадочные состояния, острые инфекционные заболевания, сахарный и несахарный диабет. Креатинурия свидетельствует о патологии поперечно-полосатых мышц (мышечная дистрофия, атрофия, миастения). Гипокреатинурия наблюдается при заболеваниях почек, а именно - при хроническом нефрите, мышечной атрофии, после перенесенных инфекций, в преклонном возрасте и при алиментарной дистрофии.

studfiles.net

Количественное определение креатинина в крови и моче

Креатинин является компонентом остаточного азота крови. Это конечный продукт превращения креатинфосфата в мышцах, мозге. Креатинфосфат в свою очередь участвует в энергообеспечении данных тканей. При участии фермента креатинкиназы происходит расщепление креатинфосфата с образованием энергии и креатинина, который экскретируется из организма с мочой. Основное диагностическое использование креатинина – это оценка почечной фильтрации. При нарушении фильтрации в почках происходит нарастание креатинина в крови и снижение его в моче. По содержанию креатинина в крови и моче можно рассчитать клиренс креатинина, данный показатель позволяет оценить скорость почечной фильтрации. При нарушении

функции почек клиренс креатинина снижается. Повышение экскрекции креатинина с мочой может наблюдаться при лихорадочных состояниях, недостаточности печени, инфекционных заболеваниях, а также при высоких физических нагрузках. По количеству выделяемого креатинина можно судить об интенсивности физической нагрузки у спортсменов и тренированности мышц. Уменьшение креатинина в моче связано с мышечной атрофией, параличами, хроническими заболеваниями почек (амилоидоз). Определение содержания креатинина в сыворотке (плазме) крови и моче основано на реакции Яффе.

Принцип метода:креатинин в щелочной среде реагирует с пикриновой кислотой с образованием комплекса желто-красного цвета. Скорость

образования комплекса пропорциональна содержанию креатинина в исследуемом материале. Нормы:в сыворотке крови женщины – 44-88 мкмоль/л, мужчины – 44-100 мкмоль/л (нормы могут варьировать в зависимости от конкретного метода); в моче – 4,4-17,7 ммоль/сутки.

Тестовый контроль по теме «Обезвреживание аммиака. Остаточный азот крови»

Тест 1

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ.

Ферменты орнитинового цикла локализованы:

а) на мембране митохондрий

б) в цитозоле клетки

в) на мембранах комплекса Гольджи

г) и на мембранах митохондрий и в цитозоле клетки

д) и на мембранах комплекса Гольджи и в цитозоле

Тест 2

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ.

Орнитиновый цикл в митохондриях протекает до образования:

а) аргининосукцината

б) карбамоилфосфата

в) фумарата

г) цитруллина

д) аргинина

Тест 3

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ.

Транспортными формами аммиака в организме принято считать:

а) ГЛУ, ГЛН

б) ГЛН, АСН

в) аммонийные соли

г) ГЛУ, АСП

д) мочевину

Тест 4

ВыбЕрИтЕ ВСЕ правильныЕ ответЫ.

Глюкозо-аланиновый цикл включает реакции:

а) декарбоксилирования ГЛУ

б) декарбоксилирование ПВК

в) восстановительное аминирование -кетоглутаровой

г) восстановительное аминирование ПВК

д) переаминирование ГЛУ и ПВК

Тест 5

Установите соответствие

(для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз или не использован совсем)

Процессы, в ходе которых образуются метаболиты:

Метаболиты:

1) обезвреживание NН3

2) обезвреживание бензойной

кислоты

3) обезвреживание продуктов

гниения триптофана

б) гиппуровая кислота

в)индикан

г) аммонийные соли

д) креатинин

Тест 6

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ.

Общим метаболитом ЦТК и орнитинового цикла является:

а) оксалоацетат

б) глутамат

в) сукцинат

г) аспартат

д) фумарат

Тест 7

Установите соответствие

(для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз)

Органы синтеза данных метаболитов:

Метаболиты:

а) мочевина

б) аммонийные соли

в) гиппуровая кислота

г) индикан

д) креатинин

Тест 8

ВыбЕрИтЕ правильный ответ.

Патология почек сопровождается:

а) снижением содержания мочевины в крови и моче

б) снижением содержания мочевины в крови и повышением в моче

в) повышением показателей мочевины в крови и моче

г) увеличением содержания мочевины в крови; снижением мочевины и ростом аммонийных солей в моче

д) увеличением содержания мочевины в крови; снижением мочевины и аммонийных солей в моче

Тест 9

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ.

Патология печени сопровождается:

а) повышением содержания мочевины в крови и понижением в моче

б) снижением содержания мочевины в крови и нарастанием в моче

в) снижением мочевины в крови, снижением мочевины и аммонийных солей в моче

г) снижением содержания мочевины в крови и моче, ростом аммонийных солей в моче

д) ростом мочевины в крови и моче

Тест 10

ВыбЕрИтЕ ВСЕ правильныЕ ответЫ.

Содержание аммонийных солей в моче может нарастать при:

а) заболевании почек

б) заболевании печени

в) сахарном диабете

г) ацидозе

д) алкалозе

Тест 11

Выберите ВСЕ правильнЫе ОТВЕТы.

Глюкозо-аланиновый цикл включает процессы :

а) переаминирования глутаминовой кислоты с ПВК

б) превращения глутаминовой кислоты в глутамин

в) транспорта аммиака в печень в виде аланина

г) транспорта ПВК в печень в виде аланина

д) переаминирования аланина в печени с -кетоглутаровой кислотой

Тест 12

Дополните ОТвет.

Значение глюкозо-аланинового цикла заключается в том, что в виде аланина из мышц одновременно выводятся два токсических продукта обмена: ____________ и __________, также поддерживается безопасный уровень __________ в крови.

Тест 13

ВыбЕрите все правильные ответы.

Реакциями первичного обезвреживания аммиака являются:

а) синтез аммонийных солей

б) синтез глутамина

в) восстановительное аминирование -кетоглутаровой кислоты

г) декарбоксилирование глутамина

д) синтез креатинина

Тест 14

Дополните ответ.

Первой реакцией орнитинового цикла является синтез ____________. Фермент, катализирующий реакцию - ______________.

Тест 15

Дополните ответ.

Последней реакцией орнитинового цикла является гидролиз ________ с образованием ___________ и ______________.

Тест 16

Установите соответствие

(для каждого вопроса – один правильный ответ, каждый ответ может быть использован один раз или не использован совсем)

Метаболиты:

Процессы, в ходе которых

дан­ные метаболиты образуются:

  1. мочевина

  2. мочевая кислота

  3. ГЛН, АСН

  4. индикан

а) обезвреживание продуктов гниения

б) обмен пуриновых оснований

в) обмен пиримидиновых оснований

г) орнитиновый цикл

д) процессы первичного обезвреживания

аммиака

ОТВЕТЫ по теме: “ОБЕЗВРЕЖИВАНИЕ АММИАКА. ОСТАТОЧНЫЙ АЗОТ КРОВИ”

1. г

2. г

3. б

4. в, д

5. 1аг 2б 3в

6. д

7. 1авг 2б 3д

8. д

9. г

10. б,в,г

11. а,в,г,д

12. ПВК аммиак глюкозы

13. б,в

14. карбамоилфосфата, карбамоилфосфатсинтаза

15. аргинина, мочевины, орнитина

16. 1г, 2б, 3д, 4а

studfiles.net


Смотрите также