Подсчет эритроцитов в камере горяева


Работа с камерой Горяева - Тесты и задачи по клинической лабораторной диагностике

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Размеры малого квадрата камеры Горяева 0,05×0,05 ммРазмеры большого квадрата камеры Горяева 0,2×0,2 ммГлубина камеры 0,1 ммОбъем жидкости под 1 малым квадратом 0,00025 мм3 (мкл) = 1/4000 мм3 (мкл)Объем жидкости под 1 большим квадратом 0,004 мм3 (мкл) = 1/250 мм3 (мкл)

Объем камеры Горяева 0,9 мм3 (мкл)

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.

Рис 1. Сетка камеры Горяева

Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева

Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)

В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 20 раз 3–5% раствором уксусной кислоты с метиленовым синим (например, 20 мкл крови и 380 мкл р-ра уксусной к-ты). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать лейкоциты в 100 больших квадратах. Расчет числа лейкоцитов осуществляют, исходя из разведения крови (20) и числа больших квадратов (100), по формуле: X = (a×250×20) / 100, где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови; а – число лейкоцитов, посчитанных в 100 больших квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных лейкоцитов умножают на 50.

(function(w, d, n, s, t) { w[n] = w[n] || []; w[n].push(function() { Ya.Context.AdvManager.render({ blockId: "R-A-323050-4", renderTo: "yandex_rtb_R-A-323050-4", async: true }); }); t = d.getElementsByTagName("script")[0]; s = d.createElement("script"); s.type = "text/javascript"; s.src = "//an.yandex.ru/system/context.js"; s.async = true; t.parentNode.insertBefore(s, t); })(this, this.document, "yandexContextAsyncCallbacks");

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 200 раз в 0,9% растворе NaCl или растворе Гайема (берется 20 мкл крови и 4 мл раствора). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать эритроциты в 5 больших квадратах разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах). Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали. Расчет числа эритроцитов осуществляют, исходя из разведения крови (200) и числа малых квадратов (80), по формуле: X = (a×4000×200) / 80, где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови; а – число эритроцитов, посчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных эритроцитов умножают на 10 000.

cldtest.ru

Практическая работа №1.Подсчет количества эритроцитов в камере горяева.

Ход работы и интерпретация результатов. Разведение крови для счета эритроцитов производят в пробирках. В этом случае для забора крови используют капилляр Сали (объем 0,02 мл), а в неболь­шую пробирку наливают соответствующее количество раствора ( 3% раствор NaCl) — 2 или 4 мл..

Считают эритроциты под большим увеличением микроскопа в малых квадратах камеры Горяева по правилу Егорова. Необходимо просчитать 5 больших (т. е. 80 малых) квадратов сетки по диагонали. Формула подсчета эритроцитов в 1 мм3 крови:

Э =[4000 А *100(200)]/80,

где N/80 — среднее число эритроцитов в 1 малом квадрате, 1/4000 — объем камеры над малым квадратом; 100 (или.200) — степень разведения крови.

При выражении количества форменных элементов в системе СИ полученный результат необходимо умножить на 106. В этом случае результат будет выражен следующим образом: Э*1012 эритроцитов в литре крови, Л *109 лейкоцитов в литре крови.

Практическая работа №5.Составление заключения о состоянии системы крови.

Общий анализ крови включает анализ содержания фор­менных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоци­тов), общего количества гемоглобина, цветного показателя, скорости оседания эритроцитов (СОЭ), соотношения форменных элементов и плаз­мы крови (гематокритный показатель), и процентного соотношения раз­личных форм лейкоцитов (лейкоцитарная формула).

Нормальные показатели. При оценке результатов анализа крови больного сравнивают полученные пока­затели с нормой.

Эритроциты, кл/л

у мужчин 4,0—5,0-1012

у женщин 4,0—4,5 • 1012

Лейкоциты, кл/л

У мужчин 4,0—6,0-109

у женщин 6,0—8,0-109

Тромбоциты, кл/л

200—400-109

Гемоглобин, г/л

у мужчин 130—160

у женщин 120—140

СОЭ, мм/ч .

у мужчин 1 — 10

у женщин 2—15

Гематокрит, %

40—45

Лейкоцитарная формула, %

базофилы

эозинофилы

нейтрофилы юные

палочкоядерные

сегментоядерные

лимфоциты

моноциты

0,1

1—5

0—1

1—5

45—70

20—40

2- 10

Эталон заключения по общему анализу крови

Эритроцитоз (эритропения, анемия), гипо-, нормо- или гиперхромия (при сочетании с эритропенией— гипо- или гиперхромная анемия), увеличение (уменьшение или нор­ма) СОЭ, ретикулоцитоз (ретикулопения), лейкоцитоз (лейкопения) со сдвигом лейкоцитарной формулы влево или вправо (при отсутст­вии сдвига не указывается), относительный базофилез (базофилопения), эозинофилез (эозинопения), нейтрофилез (нейтропения), лимфоцитоз (лимфопения), абсо­лютный (относительный) моноцитоз (моноцитопения), тромбоцитоз (тромбоцитопения).

Нормальные показатели системы крови, как правило, в заключении отражаются фразой: «показатели крови и норме».

Тестовые задания к занятию № 11– см. Сборник тестов по нормальной физиологии, Красноярск, 2007, для своего факультета. Вопросы для самоконтроля

  1. Что такое лейкоцитоз?

  2. Какие лейкоциты относятся к гранулоцитам?

  3. Напишите формулу для подсчета лейкоцитов в камере Горяева.

  4. Что понимают под микроцитозом?

  5. Что такое лейкоцитарная формула?

  6. Какие функции выполняют эозинофилы?

  7. Какова валентность железа в метгемоглобине?

  8. Какие соединения гемоглобина Вы знаете?

  9. Какие лейкоциты называют макрофагами?

  10. Что такое лейкопения?

  11. Что такое гиперхромия? В каких случаях она наблюдается?

  12. Какие виды гемоглобина вы знаете?

  13. Что называют внутренним фактором кроветворения?

  14. Какую основную функцию выполняют нейтрофилы?

  15. Сколько базофилов в норме содержится в периферической крови?

  16. Чему в норме равно количество эритроцитов у мужчин?

  17. Какие размеры в норме имеет эритроцит? Как называется такой эритроцит?

  18. Какие эритроциты называются макроцитами?

  19. На какие группы делят лимфоциты?

  20. В каких случаях развиваются истинные лейкоцитозы?

  21. Что такое цветной показатель?

  22. Каково в среднем нормальное содержание гемоглобина у женщиин?

  23. Какие лейкоциты называют микрофагами?

  24. Какие функции выполняют базофилы?

  25. Какие формы Т-лимфоцитов Вы знаете?

  26. Как влияют на эритропоэз продукты распада эритроцитов?

  27. Какие изменения наблюдаются со стороны крови во время воспалительных процессов?

  28. Какими методами определяется концентрация гемоглобина в периферической крови?

  29. Какими путями происходит разрушение эритроцитов?

  30. Основная функция эритроцитов.

  31. Сколько лимфоцитов содержится в крови?

  32. Какие эритроциты называются нормохромными?

  33. Что такое эритроцитоз?

  34. В какой желчный пигмент превращается Нв при разрушении эритроцитов?

  35. Какие виды физиологического лейкоцитоза вы знаете?

  36. Что такое сдвиг лейкоцитарной формулы влево?

  37. При каком воздействии на кровь образуется метгемоглобин?

  38. Какова функция лимфоцитов?

  39. Перечислите характерные признаки перераспределительного лейкоцитоза?

  40. В какой среде моноциты проявляют максимум фагоцитарной активности?

  41. Что такое эритропения?

  42. На какие группы делят лимфоциты?

  43. В каких случаях наблюдается абсолютная эритропения?

  44. Напишите допустимые колебания количества гемоглобина у мужчин.

  45. Что такое абсолютный эритроцитоз? В каких случаях наблюдается?

  46. Почему молодые эритроциты называются ретикулоцитами?

  47. Основная функция моноцитов.

  48. Что такое относительный эритроцитоз? В каких случаях наблюдается?

  49. Какие специфические стимуляторы эритропоэза Вы знаете?

  50. Сколько времени живет эритроцит?

  51. Где происходит эритропоэз и какие клетки относятся к незрелым формам?

  52. Сколько эозинофилов содержится в периферической крови (по лейкоцитарной формуле)?

  53. При каких состояниях организма увеличивается количество эозинофилов в крови?

studfiles.net

Что такое камера Горяева? Правила подсчета форменных элементов крови

Сегодня камера Горяева является одним из самых используемых приспособлений в лабораторной диагностике. С ее помощью можно подсчитать количество тех или иных кровяных клеток. Как известно, анализ крови крайне важен для процесса диагностики и лечения почти каждого заболевания.

Что такое Камера Горяева?

Столь известное и полезное приспособление было разработано и предложено русским врачом Н. К. Горяевым. Камера Горяева, по сути, представляет собой специфическое предметное стекло с нанесенной на него микроскопической сеткой.

Для чего используется эта камера? В первую очередь с ее помощью определяют количество кровяных клеток, в частности лейкоцитов и эритроцитов. Кстати, с ее же помощью можно определить увеличение используемого микроскопа. Формула для этого выглядит следующим образом:

В данном случае:

Строение камеры

Камера Горяева представляет собой не что инное, как предметное стекло (но намного толще обычного), разделенное поперечными бороздами на три части. Средняя часть стекла содержит специальную сетку для подсчета. Крайние же части камеры служат для притирания покровного стекла — таким образом, по центру создается закрытая камера с капиллярными пространствами по бокам, через которые она и заполняется жидкостью.

Что же касается сетки, то камера Горяева разделена на 225 больших квадратов равных размеров — расположены они в пятнадцать рядов. 25 больших квадратов дополнительно разделены на меньшие, по 16 в каждом. Длина каждой стороны этого маленького квадратика составляет 0,05 мм.

Подготовка к подсчету форменных элементов

Безусловно, в данном случае огромное значение имеет техника проведения лабораторного исследования. Конечно же, все поверхности камеры Горяева должны быть чистыми и сухими. После этого покровное стекло притирают так, чтобы можно было увидеть характерные радужные кольца. Крайне важно, чтобы в камере не было пузырьков воздуха, так как это может исказить результаты анализа.

Естественно, для того чтобы подсчитать количество форменных элементов, для каждой разновидности кровяных клеток используются разные реактивы. Например, для подсчета эритроцитов используется 0,9% раствор натрия хлорида. В пробирке нужно смешать 8 мл раствора соли и 0,02 мл крови. Так, лаборант разбавляет кровь в 400 раз. Иногда разведение может быть большим.

Для того чтобы подсчитать количество лейкоцитов, нужно смешать 0,4 мл уксусной кислоты (берут 3% или 5% раствор) и 0,02 мл крови.

После того как компоненты перемешаются в пробирке, с помощью специальной пипетки набирают небольшое количество смеси и аккуратно заполняют камеру для счета (как правило, одной или двух капель будет вполне достаточно).

Как правильно рассчитать количество кровяных клеток?

Подсчет эритроцитов в камере Горяева осуществляется в пяти больших квадратах, что равно восьмидесяти малым. Для того чтобы избежать ошибки из-за неравномерного распределения образцов крови, выбирают квадраты, расположенные по диагонали. Отдельное внимание обращают на клетки, расположенные по краям, — здесь считают эритроциты на левой и верхней стенках, но не берут во внимание те, которые расположены на нижней и правой линиях.

Для того чтобы определить количество эритроцитов в миллилитре крови, число клеток в пяти больших квадратах умножают на 20 000 (при разведении в 400 раз).

Лейкоциты в камере Горяева считают по-другому. Здесь нужно вычислить количество элементов по меньшей мере в сотне больших квадратов. Полученное количество делят на 1600, после чего умножают на 4000, а затем на 20 (степень разведения).

fb.ru

Методика подсчета эритроцитов крови в счетной камере Горяева.

Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, счетная камера Горяева, смеситель (меланжер) для подсчета эритроцитов, 3% раствор натрия хлорида, микроскоп. Объект исследования–человек.

Проведение работы: Счетную камеру помещают под микроскопом и рассматривают сетку Горяева вначале при малом, а затем при большом увеличении. Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец Ньютона. Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец ранее описанным методом. Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для эритроцитов, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Обтирают конец капилляра фильтровальной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с 3% раствором натрия хлорида, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 101 (т.е. разводят кровь в 200 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол.

Для подсчета эритроцитов берут заполненный меланжер, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя третьим и первым пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. При этом эритроциты сморщиваются и становятся заметнее. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля сама втягивается в покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, высушить и заполнить снова. Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчету. Считать эритроциты лучше при малом объективе (х8), используя при этом окуляр х15. Подсчитывают число эритроцитов в пяти больших квадратах (разделенных на 16 маленьких), расположенных по диагонали от верхнего левого квадрата вниз направо. Подсчет ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют правило Егорова: « к данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся». Подсчитав сумму эритроцитов в пяти больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объем пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм3, умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мм3 разведенной крови. Умножив на величину разведения (200), получают количество эритроцитов в 1 мм3 цельной крови. Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая: Х = (Э х 4000 х 200)/80, где х – искомое число эритроцитов в 1мм3 цельной крови, Э – сумма эритроцитов в 80 маленьких квадратах, 80 – число маленьких квадратов, в которых произведен подсчет, 200- разбавление крови. Затем полученное число эритроцитов записывают в пересчете на 1 л крови, т.е. число миллионов эритроцитов, найденных в 1 мм3, умножают на 1012.

Оформление результатов и их оценка: Записать, сколько эритроцитов содержится в 1 л исследуемой крови. Сравнить полученные результаты с нормой. У взрослых этот показатель составляет 5,0х1012 у мужчин, (3,9-4,5) х1012 у женщин, (4,0-4,5) х1012 у детей школьного возраста, (5,5-7,0) х1012 у новорожденных в первые дни жизни.

Методика определения количества гемоглобина по методу Сали.

Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, 4% раствор цитрата натрия, гемометр Сали, капилляр (с меткой 20 мм3), стеклянная палочка и пипетка. Объект исследования–человек.

Проведение работы: Определение количества гемоглобина по Сали производят колориметрическим способом, основанном на следующем принципе: если исследуемый раствор путём разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворённых веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотносится как их объёмы. Зная количества веществ в стандартном растворе (16,7%, что принято за 100% гемоглобина), легко вычислить его содержание в исследуемом растворе в относительных процентах. Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Две крайние сверху запаяны и содержат раствор солянокислого гематина, средняя – градуирована и открыта. Она предназначена для исследуемой крови. В среднюю пробирку гемометра наливают 0,1 N раствор HCL до нижней кольцевой метки. Затем из пальца обычным способом набирают кровь в капилляр до метки, удаляя излишек путём прикладывания фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Выдувают кровь на дно средней пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают её соляной кислотой из верхнего слоя. После этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по её дну, и оставляют стоять 5-10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к раствору прибавляют по каплям дистиллированнную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет одинаков с цветом стандартного (добавляяя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой). Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах. Можно вычислить относительное содержание гемоглобина в исследуемой крови, например, следующим образом. Допустим, в крови 14 г% гемоглобина, тогда 16,7г % составляет 100%, а 14,0 г% - х. Таким образом, х = 83,9%, что является показателем относительного содержания гемоглобина.

Оформление результатов и их оценка: Результаты необходимо выразить процентным соотношением плазмы и форменных элементов и сравнить с общепринятыми нормальными значениями. У взрослых это соотношение составляет 42-44% у женщин, 44-48% у мужчин, 35-40% у детей и 50-55% у новорожденных.



infopedia.su


Смотрите также