Осмотическая стойкость эритроцитов


Симптомы осмотической резистентности эритроцитов и метод определения показателей

11.08.2017

Эритроциты (другое название – красные кровяные тельца) – это клетки крови, главная функция которых – транспортировка кислорода с кровью от легких ко всем органам и тканям и перемещение углекислого газа в обратном направлении. Любое нарушение нормального функционирования организма может привести к изменению состава крови и, соответственно, к негативному воздействию на эти клетки.

Термин «резистентность» (от латинского resistentia – устойчивость, сопротивление) означает сопротивляемость какому-либо фактору. В данной статье речь пойдет об осмотической стойкости эритроцитов.

Осмотическое давление (от греческого osmos – давление, толчок) возникает в результате проникновения через полупроницаемую мембрану воды из раствора с меньшей концентрацией в раствор с большей для достижения равновесия.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Относительно эритроцитов рассматривают систему «плазма крови – мембрана – цитоплазма (внутреннее содержимое клетки)». Но в организме человека мембрана каждой клетки избирательно проницаема, то есть концентрации большинства веществ в цитоплазме клетки и окружающей ее среды различны.

Способность эритроцитов препятствовать осмотическому давлению и называется осмотической резистентностью.

Метод определения показателя

В лаборатории исследование осмотической устойчивости эритроцитов проводят разведением крови в растворах поваренной соли (NaCl) различных концентраций. В сравнении с содержанием ионов натрия и хлора в цитоплазме эритроцитов выделяют растворы:

Методика оценки осмотической резистентности эритроцитов следующая:

По оттенку определяют степень гемолиза (полный гемолиз – ярко-красный раствор, его начало – раствор с розоватым оттенком), для получения более точных показателей используют фотоколориметр – аппарат для оптического измерения концентрации вещества.

Определение осмотической резистентности эритроцитов

В лабораторной диагностике для определения осмотической резистентности эритроцитов используют следующие показатели:

В целом у людей солидного возраста осмотическая резистентность эритроцитов ниже; у детей она выше, но ее диапазон шире.

Причины изменения показателей

Повышение осмотической стойкости (максимальная резистентность меньше 0,32%) возникает при следующих патологиях:

  1. Массивные кровопотери (более 5% от объема крови), так как в качестве компенсаторного механизма в крови увеличивается число молодых эритроцитов, но в условиях дефицита ресурсов. В итоге образуется большое количество клеток с недостаточно прочными мембранами.
  2. Атеросклероз: производные холестерина могут откладываться на мембране эритроцита, что приводит к изменению ее свойств.
  3. Механическая желтуха, ее причины: закупорка желчевыводящих протоков вследствие образования желчных камней, заболевания желчного пузыря и некоторые болезни печени.
  4. Наследственные анемии, связанные с изменением структуры гемоглобина (гемоглобинопатии): талассемия, серповидно-клеточная анемия.
  5. Наследственные заболевания, в результате которых изменяется структура мембраны эритроцитов (мембранопатии).
  6. Состояние после удаления селезенки.
  7. Истинная полицитемия – чрезмерное увеличение количества клеток крови из-за опухоли в кроветворных органах.
  8. Рак органов желудочно-кишечного тракта.

Снижение осмотической резистентности (минимальная становится выше 0,48%) может быть связано с:

  1. Отравлением свинцом и его производными.
  2. Гемолитической анемией, при которой происходит массивный гемолиз красных кровяных телец. Причины различны: аутоиммунные, наследственные заболевания, гемолитическая желтуха новорожденных и другие.
  3. Небольшое снижение возможно из-за туберкулеза, сердечной недостаточности, лейкоза (рак крови), цирроза печени.

Симптомы патологической резистентности эритроцитов и способы борьбы

В норме одним из признаков «старых» эритроцитов (срок нахождения в плазме крови: 100-120 дней) становится низкая осмотическая резистентность. Другой – форма клетки: зрелые эритроциты двояковогнутые, молодые – слегка плоские, а заканчивающие клеточный цикл – сферические. Иммунные клетки опознают последние и разрушают в селезенке.

Патологическая осмотическая резистентность эритроцитов может привести к неконтролируемому гемолизу прямо в кровяном русле, что приводит к следующим симптомам:

Из-за малой специфичности симптомов данную патологию чаще обнаруживают лишь после лабораторных исследований. Наиболее эффективный способ лечения – устранение причины, то есть основного заболевания (если оно наследственное, то проводят симптоматическую терапию). Профилактические меры общие: здоровый образ жизни, правильное питание, своевременное обращение к специалистам.

lechiserdce.ru

3. Методика определения осмотической резистентности эритроцитов и диаметра эритроцитов. Определение скорости оседания эритроцитов (соэ). Диагностическое значение.

Резистентность – свойство эритроцитов противостоять разрушительным воздействиям: тепловым, осмотическим, механическим и др. В клинике наибольшее значение приобрело определение осмотической резистентности.

Принцип метода состоит в том, что эритроциты в гипертонических солевых растворах сморщиваются, а в гипотонических – набухают. При значительном набухании наступает гемолиз.

В пробирках готовят растворы хлорида натрия различной концентрации (от 0.70 до 0.22%), затем вносят в них один и тот же объем крови (0.02 мл) и оставляют на час при комнатной температуре. Через час пробирки центрифугируют и определяют начало гемолиза по легкому порозовению раствора и полный гемолиз – по интенсивной красно-лаковой окраске раствора.

В норме минимальная резистентность у взрослых людей колеблется между 0,48% и 0,46% хлорида натрия, максимальная – между 0,34% и 0,32% хлорида натрия.

Снижение осмотической резистентности эритроцитов наблюдается при наследственном микросфероцитозе (болезнь Минковского-Шоффара), аутоиммунных гемолитических анемиях. Повышение осмотической резистентности эритроцитов встречается при наследственных гемолитических анемиях, связанных с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, при некоторых гемоглобинопатиях (талассемия).

Измерение диаметра эритроцитов и графическую регистрацию распределения эритроцитов по величине (эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса) производят с помощью прямых микроскопических и электронно-автоматических методов.

Прямой микроскопический метод – это измерение диаметра эритроцитов в фиксированном и окрашенном мазке крови с использованием окуляр – микрометра и объектив-микрометра. Измеряют диаметр 200-500 различных эритроцитов, результаты распределяют по группам в зависимости от величины диаметра и устанавливают в процентах (%) относительную численность каждой группы.

Нормы: содержание нормоцитов (диаметр 6.9-8.0 мкм) составляет приблизительно 68%, микроцитов (диаметр менее 6.9 мкм) – 15%, макроцитов (диаметр более 8.0 мкм) – 17%.

Прямой микроскопический метод чрезвычайно трудоемок, отнимает много времени и поэтому уступает электронно-автоматическому методу.

Электронно-автоматический метод – это подсчет эритроцитов различного диаметра с помощью счетчиков «Культер» и «Целлоскоп».

Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса в норме имеет правильную форму с вершиной на 7.2 мкм и довольно узким основанием в пределах 6-9 мкм.

Увеличение диаметра эритроцитов (макроцитоз) со сдвигом кривой Прайс – Джонса вправо наблюдается при мегалоцитарных анемиях (витамин-В12-фолиеводефицитные), при заболеваниях печени, при алкоголизме.

Уменьшение диаметра эритроцитов (микроцитоз) со сдвигом эритроцитометрической кривой влево встречается при наследственном микросфероцитозе, железодефицитной анемии, интоксикации свинцом.

Нормальные эритроциты имеют форму диска с вдавлением в центре. В патологических случаях могут появлять­ся эритроциты с измененной формой. Изменение формы эритроцитов называется пойкилоцитозом. Встречаются следующие формы эритроцитов.

Сфероциты - эритроциты, имеющие округлый или ша­рообразный вид, утратившие двояковогнутую форму. Микросфероциты имеют иногда обычные размеры. Сфероцитоз бывает наследственным и приобретенным. Наблю­дается при наследственном микросфероцитозе (болезнь Минковского-Шоффара), гемолитических анемиях, сеп­сисе, искусственных клапанах сердца.

Овалоциты (эллиптоциты) - эритроциты овальной фор­мы. Встречаются при талассемии, наследственном овалоцитозе, тяжелых железодефицитных анемиях, анемиях при лейкозах.

Мишеневидные эритроциты (таргентные клетки, лептоциты) - плоские, бледные, с центральным скоплением гемоглобина в виде мишеней. Бывают при талассемии, тя­желых железодефицитных анемиях, после спленэктомии, при различных видах желтух, алкоголизме. Стоматоциты — центральное просветление у таких эритроцитов изогнуто, напоминает форму рта. Встречают­ся при наследственных стоматоцитозах (относятся к гемо­литическим анемиям), после переливания крови, при опу­холях и циррозе печени, остром алкогольном отравлении.

Акантоциты - эритроциты зазубренной формы, имею­щие выпячивания различной величины. Обнаруживают­ся при наследственных акантоцитозах, тяжелых заболе­ваниях печени (токсических гепатитах, циррозах), гипо­тиреозе, терапии гепарином, хроническом алкоголизме, после спленэктомии.

Эхиноциты - эритроциты с несколькими выростами, как бы покрытые шипами, колючками. Такие формы наб­людаются при тромбоцитопенической пурпуре, раке же­лудка, уремии. Если в мазке все эритроциты имеют такую форму, это говорит о неправильной фиксации мазка.

Каплевидные эритроциты имеют форму капель. Встре­чаются при миелофиброзе и токсических гепатитах.

Анулоциты - эритроциты в виде пустых колец. Наблю­даются в периферической крови при тяжелых формах железодефицитных анемий.

Серповидные эритроциты (дрепаноциты) имеют форму серпов, полулуний, овсяных зерен. Образуются в крови при серповидно-клеточной анемии.

В отличии от анизоцитоза, пойкилоцитоз является бо­лее поздним признаком анемии и отмечается при более тя­желом течении.

В норме зрелые эритроциты периферической крови не содержат никаких включений. И только в ретикулоцитах при суправитальной окраске красителем бриллиант-крезил-блау выявляется зернистосетчатая субстанция.

При различных патологических состояниях в перифе­рической крови обнаруживаются эритроциты с различны­ми включениями: базофильная пунктация — мелкая, си­него цвета, равномерно расположенная в цитоплазме зер­нистость, встречается при отравлении свинцом, ртутью и нередко при некоторых анемиях (мегалобластные, талассемия и др.); крапчатость Шуффнера - мелкая красного цвета зернистость, отмечается при трехдневной малярии; пятнистость Маурера - небольшие сиреневого или красно­го цвета пятнышки, встречаются при тропической маля­рии; тельца Гейнтца-Эрлиха - круглые резко очерченные включения по периферии эритроцита, появляются при отравлении гемолитическими ядами типа нитробензола, анилина, фенилгидразина, при лучевой болезни; тельца Жолли - круглые, сине-фиолетового цвета образования; кольца Кебота - нежные петельки красного цвета. Они имеют вид колечка, восьмерки или скрипичного ключа. Тельца Жолли представляют собой остатки ядерной суб­станции нормобластов, а кольца Кебота - остатки ядерной оболочки и встречаются главным образом при витамин-В12- и фолиеводефицитной анемии, тяжелых отравлениях гемолити­ческими ядами.

Помимо телец Жолли и колец Кебота при витамин-В12- и фолиеводефицитной анемии в периферической крови можно увидеть клеточные элементы мегалобластического типа кроветворения, который в норме отмечается только в эмб­риональном периоде.

При мегалобластическом кроветворении в кроветвор­ной ткани вместо эритробластов образуются мегалоблас­ты, которые способны к ранней гемоглобинизации при сохранившейся еще структуре ядра. По сродству к щелоч­ным или кислым красителям они подразделяются на базофильные, оксифильные и полихроматофильные. Большая их часть распадается в костном мозге, а меньшая - созре­вает до мегалоцитов, которые и поступают в перифериче­скую кровь. При резком обострении заболевания в пери­ферическую кровь попадают не только мегалоциты, но и мегалобласты. Мегалобласт представляет собой крупную клетку (диаметром более 15 мкм) с эксцентрично располо­женным круглым или овальным ядром. Мегалоциты - это безъядерные клетки размером от 12 до 15 мкм, значитель­но насыщенные гемоглобином. Поэтому цветной показа­тель, как правило, при В12- и фолиево-дефицитной ане­мии больше 1,0 (эту разновидность анемии относят к гиперхромным).

Оседание эритроцитов – это свойство клеток крови осаждаться (седементировать) за пределами кровеносного русла (на дне сосуда при сохранении крови в несвертывающемся состоянии), оставляя сверху слой плазмы. Этот феномен лежит в основе определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ), которая выражается в миллиметрах плазмы, отстаивающейся в течение часа.

Наиболее распространен микрометод определения СОЭ в модификации Панченкова.

Принцип метода: при стоянии крови, стабилизиро­ванной цитратом натрия, эритроциты оседают с различ­ной скоростью в зависимости от физико-химических свойств крови. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) вы­ражается в мм/ч.

Оборудование и реактивы:

  1. аппарат Панченкова, состоящий из штатива с капил­лярами шириной 1 мм, на стенке которых нанесены деле­ния от 0 (сверху) до 100 (снизу). На уровне 0 мм имеется бук­ва К (кровь), а на середине капилляра, около метки 50 мм - буква Р (реактив);

  1. агглютационные (видалевские пробирки);

  1. 5% свежеприготовленный раствор натрия цитрата;

4) вата;

Ход исследования. В капилляр Панченкова набирают 5% раствор натрия цитрата до метки «Р» - 50 мм и выду­вают его в видалевскую пробирку. Затем этим же капил­ляром, держа его горизонтально, из уколотого пальца на­бирают два раза кровь до метки «К» - 0 мм и выпускают ее в пробирку с натрия цитратом. Хорошо перемешивают. Этим же капилляром набирают цитратную кровь до мет­ки «К» и ставят строго вертикально в штатив. Получен­ное соотношение объемов крови и натрия цитрата равно 1:4. Через 1 ч отмечают по делениям на капилляре число миллиметров освободившегося от эритроцитов столбика плазмы.

Интерпретация полученных данных. Нормальные показатели СОЭ:

Дети имеют более низкую СОЭ (1-8 мм/ч), чем взрослые, а лица среднего возраста меньше, чем старики.

Изменение СОЭ при патологии.

  1. Значительное увеличение – опухолевые заболевания, диффузные болезни соединительной ткани, тяжелые инфекции, болезни почек, протекающие с нефротическим синдромом, выраженная витамин-В12-фолиеводефицитная анемия.

  2. Умеренное увеличение – острые и хронические инфекционные заболевания, локализированные гнойные процессы, инфаркт миокарда, гипертиреоз, тяжелый сахарный диабет, внутренние кровотечения, интоксикации ртутью и мышьяком.

  3. Снижение – эритремия, вторичные симптоматические эритроцитозы, ацидоз, тяжелая сердечная недостаточность.

studfiles.net

Осмотическая резистентность эритроцитов

Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют их резистентность к различным воздействиям. Наиболее часто в практике определяют осмотическую резистентность эритроцитов. Различают минимальную и максимальную резистентность. Минимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического (менее 0,85%) раствора натрия хлорида (в серии постепенно уменьшающихся концентраций), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе 3 ч. Максимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов.

Унифицированная методика определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Л. И. Идельсона

Принцип. Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуференных гипотонических растворах натрия хлорида.

Реактивы: основной раствор (по осмотической концентрации соответствует 10% раствору натрия хлорида), pH 7,4: натрия гидрофосфат безводный (Na2HPO4) — 27,31 г или кристаллогидрат (Na2HPO4 × 2Н20) — 34,23 г; натрия дигидрофосфат кристаллогидрат (Nah3PO4 × 2Н2O) — 4,86 г: натрия хлорид — 180 г; дистиллированная вода — до 2 л. Раствор можно хранить в закрытой посуде в холодильнике несколько месяцев.

Основной раствор разводят в 10 раз дистиллированной водой и получают раствор, по осмотической концентрации соответствующий 1% раствору натрия хлорида. Из этого раствора готовят рабочие растворы, соответствующие растворам натрия хлорида следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10%%. Целесообразно приготовить по 100 мл этих рабочих растворов. Хранят в холодильнике, пригодны они в течение 2 нед.

Специальное оборудование: 1) фотоэлектроколориметр; 2) термостат на 37 °С.

Ход определения. В две стерильные пробирки с 2 каплями гепарина (500 ЕД) вносят по 1,5 мл крови, перемешивают и одну используют для иссле дования, а вторую оставляют на сутки в термостате. В ряд центрифужных пробирок (14 шт.) разливают по 5 мл каждого из рабочих растворов с концентрацией натрия хлорида от 1 до 0,10%. В каждую пробирку добавляют по 0,02 мл гепаринизированной крови и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Центрифугируют смесь при 2000 об./мин в течение 5 мин. Из каждой пробирки сливают надосадочную жидкость и фотометрируют при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы.

Контрольная проба — надосадочная жидкость в пробирке, содержащей рабочий раствор с концентрацией натрия хлорида 1%.

Расчет. За полный (100%) гемолиз принимают гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида. Вычисляют процент гемолиза в каждой пробирке, сравнивая величину экстинкции надосадочной жидкости с экстинкцией, принятой за 100 %, по формуле:

где Е1 — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида; Ех — экстинкция исследуемой пробы; 100 — полный гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида.

На следующий день повторяют исследование с кровью, инкубированной в течение 24 ч при 37 °С.

Нормальные величины. У здоровых людей в свежей крови гемолиз (минимальная резистентность эритроцитов) начинается при концентрации натрия хлорида 0,50–0,45 %, а полный гемолиз (максимальная резистентность эритроцитов) наблюдается в 0,40–0,35% растворе натрия хлорида.

Клиническое значение. Данное исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Наименее устойчивы к гипотоническим растворам сфероциты (появление гемолиза эритроцитов отмечено при более высоких концентрациях натрия хлорида 0,75–0,70 %). Понижение осмотической устойчивости наблюдается не только при наследственном микросфероцитозе, но и при некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, при аутоиммунной гемолитической анемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов характерно для талассемии, гемоглобинопатии, возможно при механической желтухе.

См. также:

onlab.info

Осмотическая резистентность эритроцитов

Осмотическая резистентность эритроцитов

Нормальная максимальная осмотическая резистентность эритроцитов составляет 0.34— 0,32 %, а минимальная — 0,48—0,46 %.

Под осмотической резистентностью эритроцитов понимается их устойчивость по отношению к гипотоническим растворам натрия хлорида. Минимальная резистентность

эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида (в серии растворов с постепенно уменьшающейся концентрацией), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе в течение 3 ч; максимальная — минимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов крови, помещенных в этот раствор.

Максимальная осмотическая резистентность ниже 0,32 % возможна после больших кро-вопотерь и спленэктомии, при гемоглобинозе С, застойных желтухах, а также в некоторых случаях полицитемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов ниже 0,32 % характерно для талассемии и гемоглобинопатии.

Минимальная осмотическая резистентность выше 0,48 % наблюдается при семейной гемолитической анемии, гемолитической анемии новорожденных и отравлении свинцом. Можно обнаружить небольшие изменения и при токсикозах, бронхопневмониях, туберкулезе, малярии, лейкемии, миелосклерозах, лимфогранулематозе, циррозе печени. Случаи расширения границ осмотической резистентности (одновременное понижение минимальной и повышение максимальной резистентности) наблюдаются в начале острого гемолитического криза и в остром периоде пернициозной анемии.

Кислотная резистентность эритроцитов (проба Хема)

В норме проба Хема отрицательная.

Кислотную резистентность определяют на основании различной кислотоустойчивости эритроцитов по отношению к HCl.

При анемии Маркиафавы и некоторых других гемолитических анемиях в подкисленной пробирке по сравнению с контролем обнаруживают ясный гемолиз.

Серповидные эритроциты в крови

В норме проба на серповидность эритроцитов отрицательная.

Пробу применяют для диагностики гемоглобинопатии. Гемоглобин S при понижении парциального давления кислорода кристаллизуется в форме тактоидов и придает эритроцитам форму серпа. Среди гемоглобинопатии чаще всего встречается серповидно-клеточная анемия, поэтому выявление эритроцитов в виде серпа позволяет установить этот вид анемии.

Предыдущая Следующая

www.urologi.ru


Смотрите также