Определение количества эритроцитов в камере горяева


Физиология красной крови

Цель: ознакомиться с методиками подсчета эритроцитов и гемоглобина у человека.

Задачи:

1. Определить гематокрит.

2. Определить количество эритроцитов.

3. Определить концентрацию гемоглобина.

4. Рассчитать цветной показатель.

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, Камера Горяева, покровное стекло, 3,5% раствор NaCl, пипетки на объем не менее 5 мл, капилляры Сали, раствор цитрата натрия, центрифуга для определении гематокрита, линейка, трансформирующий раствор, стандартный раствор гемоглобина с известной концентрацией гемоглобина (120г/л), фотоэлектрокалориметр (ФЭК), кюветы толщиной 10 мм и 3 мм.

Анализ функций системы крови у человека широко применяется в процессе физиологических исследований в спортивно-медицинской практике для изучения здоровья спортсменов.

При мышечной работе кровь обеспечивает в соответствии с повышением интенсивности обмена веществ значительное усиление дыхательной функции. Это проявляется в увеличении кислородной емкости крови. О ней судят по числу эритроцитов и количеству гемоглобина. Большие нагрузки, вызывающие выраженные изменения кислотно-щелочного равновесия в плазме крови, могут быть причиной временного уменьшения числа эритроцитов в связи с разрушением их оболочек, что стимулирует восстановительные процессы.

Работа № 1. Забор крови из пальца

Правильное получение капиллярной крови является одним из решающих условий, обеспечивающих точность и воспроизводимость результатов. Общее время, затрачиваемое на взятие крови, не должно превышать 2 - 3 мин. Во взятой крови должны отсутствовать признаки свертывания.

Ход работы

Вымойте руки с мылом в проточной воде, высушите их. Забор крови производите из большого или безымянного пальца левой руки (допустимо получать кровь из любого другого пальца). Берущий кровь должен пользоваться резиновыми перчатками. Кожу подушечки пальца протрите ватным тампоном, смоченным 70 % спиртом, и дождитесь ее высыхания. Левой рукой слегка сдавите мякоть пальца в области предполагаемого укола. В правую руку возьмите стерильный скарификатор, ориентируя его строго перпендикулярно к поверхности кожи в месте укола. Наиболее удобным местом прокола кожи является точка слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. Укол производите на всю глубину острия иглы, рассекая при этом кожу поперек дактилоскопических линий. Первую каплю крови удалите, потому что она содержит случайные примеси, лимфу и поврежденные форменные элементы. Далее забирайте кровь на необходимые анализы. После окончания забора крови к месту прокола приложите ватный тампон, смоченный спиртом или раствором йода. Забор крови из пальца осуществляйте в специальные в каждом случае стеклянные капилляры для стандартизации процесса взятия крови. При этом капилляры предварительно обработайте антикоагулянтом - веществом, препятствующим свертыванию крови - гепарином или раствором лимоннокислого натрия (цитрата натрия).

Работа № 2. Определение гематокрита

Гематокрит - это показатель, характеризующий соотношение форменных элементов и плазмы крови. Гематокрит - доля объема крови, которую занимают форменные элементы. Определяется с помощью центрифугирования цельной крови в капилляре в специальной центрифуге.

studfiles.net

Ход работы

Для определения гематокрита произведите забор крови из пальца (работа № 1) в специальный капилляр для определения гематокрита. Капилляр обязательно обработайте антикоагулянтом - гепарином или раствором цитрата натрия. Капилляр заполните кровью на 7/8 его длины (при заполнении капилляра в него не должны попадать пузырьки воздуха), закупорьте специальной замазкой с того конца, через который брали кровь. Поместите капилляры с кровью в ротор центрифуги таким образом, чтобы закупоренные концы были направлены кнаружи от оси вращения и упирались в резиновую прокладку, центрифугируйте в течение 5 мин. Определите гематокрит по специальной шкале или с помощью линейки. В последнем случае измерьте высоту столбика эритроцитов (Вэ) и высоту столбика плазмы (Вп). Рассчитайте гематокрит (как процент форменных элементов от всего объема крови) по формуле:

Рекомендации по оформлению протокола работы. Полученные результаты определения гематокрита занесите в протокол опытов, оцените их, исходя из того, что показатели нормы гематокрита для здорового человека: 43% для женщин, 45% - для мужчин. Такое состояние носит название нормоцитемии. Если относительный объем форменных элементов составляет менее 43%, то это носит название олигоцитемии, а если более 45%, то полицитемии.

Увеличение гематокрита наблюдается при эритроцитозе, уменьшение - при эритропении или микроцитозе (уменьшение размера эритроцитов) на фоне неизменной концентрации эритроцитов. Теоретически гематокрит должен увеличиваться при макроцитозе (увеличение размера эритроцитов), но последний наблюдается только на фоне выраженной эритропении.

Новорожденные имеют высокий гематокрит, составляющий в среднем 57 %. Дальнейшая динамика этого показателя соответствует изменениям количества эритроцитов в периферической крови.

Знакомство с устройством камеры Горяева

Камера Горяева представляет собой специальное устройство для подсчета форменных элементов крови. На ее поверхности нанесена сетка, разделяющая пространство на квадраты: большие и маленькие.

Камера Горяева представляет собой толстое прямоугольное стекло с двумя сетками, выгравированными на его поверхности (рис. 12). Сетки отделены одна от другой поперечной канавкой во избежание затекания жидкости. Двумя глубокими продольными

Рис. 12. Камера Горяева

А – вид сверху (а – маленький квадрат,

б – большой квадрат);

В – вид сбоку; В – сетка

канавками сетки отделены от стеклянных прямоугольных пластинок, к которым притирают шлифованное покровное стекло. Плоскость поверхности этих пластинок находится на 0,1 мм выше плоскости, в которой нанесены сетки. Камера состоит из 225 больших квадратов. Сто квадратов не разлинованы; 25 больших квадратов разделены каждый на 16 малых объемом 1/4000 мкл. Во избежание двукратного подсчета клеток, находящихся на линиях сетки, пользуются правилом буквы «Г»: считаются клетки, относящиеся к данному квадрату и лежащие внутри квадрата и на левой и верхней границе; клетки, пересекающие правую и нижнюю границу, не подсчитываются.

studfiles.net

Работа № 1. Подсчет эритроцитов крови в камере Горяева.

Оборудование:микроскоп, счетная камера Горяева, 4 мл 3% раствора хлорида натрия, капилляр от гемометра Сали, скарификатор, вата, спирт.

Цель работы:научиться определять количество эритроцитов в крови человека, оценивать результаты.

Ход работы:

1. Покровное стекло притирают к стеклу камеры Горяева до появления ньютоновских колец.

2. В пробирку налить 4 мл 3% раствора хлорида натрия.

3. Набрать в капиллярную пробирку от гемометра Сали до метки крови (0,02 мл).

4. Осторожно выдуть кровь в пробирку с 3% раствором хлорида натрия и ополоснуть капилляр этим же раствором. Содержимое пробирки тщательно перемешать.

5. Концом круглой стеклянной палочки взять из пробирки, наклонив ее каплю крови и заполнить камеру Горяева.

6. Поместить камеру на предметный столик микроскопа под малое увеличение, найти сетку счетной камеры и перевести тубус микроскопа на большое увеличение.

7. Подсчитать количество эритроцитов в 5 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких, которые расположены по диагонали сетки. При подсчете используют правило Егорова: “относящиеся к данному квадрату считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границах”.

8. Количество эритроцитов вычисляется по формуле:

где А – сумма эритроцитов в 80 маленьких квадратиках,

1/4000 мм3 – объем камеры Горяева над одним маленьким квадратиком,

200 – разведение крови в 3% NaCl,

80 – число маленьких квадратиков, в которых подсчитывают эритроциты.

Результаты:

Выводы:

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА

В КРОВИ МЕТОДОМ САЛИ

Определение количества гемоглобина в крови производится колориметрическим методом Сали. Для этого имеется специальный прибор колориметр. Определить количество исследуемого вещества в колориметре можно в тех случаях, когда имеется параллельная зависимость между концентрацией данного вещества в растворе и интенсивностью окрашивания. Простейший тип колориметра – гемометр Сали, которым обычно пользуются для определения Нb в крови. Он состоит из трех пробирок одинакового диаметра. Одна из них пустая, а в других, запаянных с обоих концов, содержится стандартный раствор солянокислого гематина, соответствующий высшему пределу нормы Нb 166,7 г/л. Все три пробирки вставлены в небольшой штатив, задняя стенка которого сделана из стекла молочного цвета. К гемометру приложена пипетка ёмкостью 0,02 мл (или 20 мм3).

Работа № 2. Определение количества гемоглобина в крови по способу Сали (гематиновый метод).

Оборудование:гемометр Сали, пипетка, скарификатор, 0,1 н раствор хлористоводородной кислоты, вата, спирт.

Цель работы:научиться определять количество гемоглобина по способу Сали и оценивать результаты.

Ход работы: в среднюю пробирку гемометра наливают 0,1 н раствор хлористоводородной кислоты до метки. Пипеткой от гемометра Сали набирают 0,02 мл крови (до метки) и выдувают на дно пробирки. Содержимое пробирки перемешивают, оставляют на 5-10 минут для превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к содержимому пробирки добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет одинаков с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой). Цифра, стоящая на уровне мениска полученного раствора, указывают на содержание гемоглобина в исследуемой крови в г%. Для перевода в г/л полученную цифру умножают на 10. В норме концентрация гемоглобина (абсолютное содержание) у мужчин – 130-160 г/л, у женщин – 120-140 г/л. Сравнить полученный результат с нормой, оценить результат.

Результаты:

Выводы:

РАСЧЕТ ИНДЕКСОВ ЭРИТРОЦИТОВ.

Цветовой показатель характеризует соотношение между количеством гемоглобина крови и числом эритроцитов. Цветовой показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. Цветовой показатель здорового человека равен 0,85-1,05. Если цветовой показатель выше нормы – гиперхромия. Если ниже нормы – гипохромия.

Работа № 3. Вычисление индексов эритроцитов.

Цель работы:определить степень насыщенности эритроцитов гемоглобином, оценить результат.

Ход работы:

1. Цветной показатель (ЦП)или (Fi) фарб-индекс (Farb – цвет, index – показатель) относительное содержание гемоглобина в эритроцитах, рассчитывается по формулам:

ЦП= __________3*Hb (г/л)___________________

3 первые цифры числа эритроцитов в млн.

В нормеЦП =0,8-1,0 (у новорожденных – 0,9-1,3; до 1 года – 0,75-0,8; после 1 года – как у взрослых).

2. Среднее содержание гемоглобина в эритроците– СГЭ (MCH, НbЕ):

Вычисление СГЭ производится по формуле:

СГЭ= содержание гемоглобина(г/л)_

число эритроцитов в л

В норме 24-36 пг (10-12г), (у взрослых – 30 пг; у новорожденных – 33,3 пг; 5-6 мес. – 26,1пг)

Результаты:

Выводы:

lektsia.com

Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Смесители для эритроцитов и лейкоцитов.
  2. Пробирки типа серологических.
  3. Пипетки на 1 и 5 мл.
  4. Капилляры к гемометру Сали.
  5. Стеклянные палочки.
  6. Глазные пипетки.
  7. Счетные камеры Горяева со шлифованными стеклами к ним.
  8. Микроскопы.
  9. Колбочки с чистой водой.
  10. Поваренная соль.
  11. Сулема.
  12. Сернокислый натрий.
  13. Ледяная уксусная кислота.
  14. 96° этиловый спирт.
  15. Генцианвиолет (метиленовая синька).
  16. Набор для взятия крови из пальца.

Взятие крови в смесители для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Для подсчета количества эритроцитов и лейкоцитов необходимы следующие реактивы:

  1. 3% раствор хлористого натрия (NaCl) : 3 г хлористого натрия помещают в колбочку на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.
  2. Реактив Гайема: к 0,5 г сулемы, 1 г хлористого и 5 г сернокислого натрия приливают 200 мл дистиллированной воды. Оба реактива сохраняют эритроциты.
  3. 3% раствор уксусной кислоты - 3 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Реактив подкрашивают 1% водным раствором генцианвиолета из расчета 5-6 капель краски на 10 мл 3% уксусной кислоты.

Кровь для подсчета эритроцитов и лейкоцитов берут в специальные смесители или в пробирки. На чистый и сухой смеситель для эритроцитов надевают резиновую трубочку со стеклянным мундштуком, после чего в него насасывают кровь, без пузырьков воздуха, точно до метки 0,5, затем этим же смесителем набирают 3% раствор хлористого натрия или реактив Гайема точно до метки 101, не допуская появления пузырьков воздуха. При этом кровь разводится в 200 раз. Со смесителя снимают резиновую трубочку, захватывают его между пальцами, несколько раз встряхивают, прокалывают им бумажку, на которой указана фамилия больного, и кладут его на стол в горизонтальном положении.

В чистый сухой смеситель для лейкоцитов таким же способом, как и в смеситель для эритроцитов, насасывают кровь до метки 0,5, после чего тем же смесителем набирают 3% раствор уксусной кислоты до метки 11. При этом кровь разводится в 20 раз. Затем со смесителя снимают резиновую трубочку, несколько раз встряхивают его, прокалывают им бумажку, на которой указана фамилия больного, и кладут на стол в горизонтальном положении.

Взятие крови в пробирки для подсчета эритроцитов и лейкоцитов по Н. М. Николаеву

Для каждого взятия крови берут две нумерованные пробирки, серологическую и агглютинационную. В серологическую пробирку помещают 4 мл 3% раствора хлористого натрия или реактива Гайема, а в агглютинационную - 0,4 мл 3 % раствора уксусной кислоты. В каждую пробирку вносят по 0,02 мл крови, взятой капилляром от гемометра, и тотчас же смешивают содержимое пробирок, вращая их между ладонями.

В серологической пробирке (для эритроцитов) получают разведение крови в 200 раз, а в агглютинационной (для лейкоцитов) - в 20 раз.

Изучение счетной камеры Горяева и заполнение ее кровью для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в специальных счетных камерах. Для этой цели пользуются счетной камерой Горяева, которая представляет собой стекло с нанесенными на него двумя сетками. Сетки отделены одна от другой углублениями и делятся разграничительными линиями на 225 квадратов. Площадь сетки 9 мм2, высота, создающаяся при притирании шлифованного покровного стекла в камере, 0,1 мм, объем 0,9 мм3. Перед заполнением камеры кровью ее моют водой и насухо вытирают.

К сухой поверхности камеры притирают шлифованное покровное стекло, плавно продвигая его по ней взад и вперед до появления цветных колец Ньютона в местах соприкосновения покровного стекла со стеклом камеры. Затем кровь в смесителе встряхивают в течение 1-2 минут, после чего из смесителя выпускают на ватку 1-2 капли крови, следующую каплю помещают перед шлифованным покровным стеклом. При нанесении капли крови надо следить за тем, чтобы в пространство над сеткой камеры не попал воздух и чтобы не было избытка жидкости. Одну сетку заполняют для подсчета эритроцитов, вторую - для подсчета лейкоцитов.

Для заполнения камеры Горяева кровью, взятой по способу Н. М. Николаева (пробирочный метод), поступают следующим образом. К счетной камере притирают шлифованное стекло. Из каждой пробирки, предварительно встряхнув ее, с помощью стеклянной палочки с оплавленным концом берут по одной капле жидкости и заполняют ими раздельно обе сетки камеры, для чего каплю помещают перед щелью, образующейся между шлифованным стеклом и счетной камерой, в результате чего жидкость заполняет пространство над сетками.

Подсчёт эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере Горяева

Количество эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева подсчитывают с помощью микроскопа. Для этого заполненную разведенной кровью камеру Горяева помещают на предметный столик микроскопа и под малым увеличением (окуляр 15 X или 10Х, объектив 8Х), с опущенным конденсором находят сетку камеры. К подсчету форменных элементов приступают через 2-3 минуты после заполнения камеры кровью.

Эритроциты подсчитывают в пяти квадратах, каждый из которых разделен на 16 маленьких квадратиков. Подсчет начинают с левого верхнего квадрата, а затем продвигают камеру по диагонали сверху вниз. Во избежание повторного подсчета одних и тех же эритроцитов руководствуются следующим правилом: все эритроциты внутри квадратика и на разграничительных линиях подсчитывают только тогда, когда они большей своей половиной заходят внутрь квадратика; клетки, пересеченные разграничительной чертой пополам, подсчитывают лишь на двух сторонах из четырех сторон квадрата (на левой и верхней); клетки, выходящие большей своей половиной за пределы разграничительных линий, совсем не считают. Результаты подсчета эритроцитов по каждому из пяти больших квадратов записывают и суммируют. Для расчета количества эритроцитов пользуются следующей формулой:

где х — количество эритроцитов в 1 мм3 крови; а — сумма эритроцитов, подсчитанных в пяти квадратах; б — разведение крови в 200 раз; в — количество сосчитанных маленьких квадратиков — 80.

Для упрощения расчета к количеству подсчитанных эритроцитов приписывают четыре нуля. В норме количество эритроцитов от 4 500 000 до 5 000 000 в 1 мм3 крови. Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах. При подсчете их руководствуются теми же правилами, которые указаны для эритроцитов, а затем производят расчет по приведенной выше формуле, в которой цифра разведения равна 20, а количество подсчитанных квадратов — 1600. Для простоты расчета количество подсчитанных лейкоцитов умножают на 50 или делят на 2 и приписывают два пуля.

В норме количество лейкоцитов от 5000 до 8000 в 1 мм3 крови.

ginekolog.my1.ru


Смотрите также